葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度(版本2)概述.ppt

生物化学与分子生物学教研室 xxx QQ:xxxxxxxxxx 电话:xxxxxxxxxxx 1.葡萄糖氧化酶试纸法（干化学法）：特异性强，临床常用。检测原理是葡萄糖氧化酶法。 血糖测定（葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法）及肾上腺素对血糖浓度的影响, 尿糖检测 实验课安排 二、注射肾上腺素 三、30min（尿糖检测） 四、注射后取血 五、血糖检测 一、注射前取血 实验内容： 测定血糖浓度，观察肾上腺素对血糖浓度的影响 半定量测量尿糖 实验要求： 掌握葡萄糖氧化酶测定血糖的方法、原理、测定操作、正常参考值、临床意义 熟悉尿糖测定及意义 血糖的调节 血糖过高 血糖不足 胰高血糖素 糖皮质激素 血糖的来源和去路 血糖 氧化分解 合成 转化 H2O+CO2+ATP 糖原 其它糖、 非糖物质 食物 糖原 非糖物质 消化吸收 分解 糖异生 胰岛素 血糖平衡 肾上腺素 血糖调节相关神经系统：下丘脑+自主神经 尿糖 注射葡萄糖 血糖指血液中所含的葡萄糖，它是给机体提供能量的主要物质，也是体内糖代谢情况的重要生理指标。 一）神经系统调节：下丘脑+自主神经 二）体液调节，也叫激素调节，有升糖激素和 降糖激素 三）还有一些器官：肝、肌肉以及肾脏等 化学感受器 肾上腺素是肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺类激素，主要在应激状态下发挥升高血糖的作用。 肾上腺素 机制 cAMP 肝、肌细胞的膜受体 血中的肾上腺素 磷酸化酶 葡萄糖 乳酸 肝糖原 糖酵解 乳酸循环 级联激活 受刺激 结合 促进 肌糖原 分解 糖代谢紊乱 高血糖 低血糖 ＞6.9 ＜3.0 3.89-6.11 检测 1.临床医生：作为疾病诊断依据、指导用药以及判断升糖药或降糖药的疗效 2.糖尿病患者：监控自身血糖及尿糖变化，调节饮食、运动、就医等生活规律。 ＞肾糖阈 8.96-10.08 单位：mmol/L 尿糖 正常血糖 病理性 病理性 生理性 生理性 生理性 长期饥饿、剧烈运动后 病理性 胰岛β细胞增生、胰岛β细胞瘤、 胰高血糖素分泌不足、严重肝病患者 生理性 餐后、情绪紧张时,肾上腺素分泌增加、注射葡萄糖 病理性 糖尿病、内分泌腺功能障碍、 颅内压增高、严重脱水 临床上重要的糖代谢紊乱也主要是血糖浓度过高（高血糖症）和过低（低血糖症）。 血糖测定方法 葡萄糖氧化酶法 广泛使用,特异性强、价廉、操作简单 福林-吴宪法 邻甲苯胺法 己糖激酶法 超微量还原铁氰化钾法 第一步： 第二步： Trinder反应 H2O2 ＋苯酚＋4-氨基安 替比林 H2O ＋ 醌亚胺 +O2 红色 氧化缩合 37oC 505nm 比色测定 37oC 葡萄糖＋O2＋H2O 葡萄糖酸＋H2O2 氧化 葡萄糖氧化酶法原理 葡萄糖氧化酶（GOD） 辣根过氧化物酶（POD） 具体操作 （1）空腹称重（已称好） （2）耳缘静脉取血 取血部位去毛，接着擦拭酒精，涂二甲苯、凡士林。 用三棱针刺破耳缘静脉放血，离心管收集血液2-3ml（干棉球压迫止血），离心，1500rpm，10min，取出放试管架上备用。 （3）注射肾上腺素 腹侧皮下注射肾上腺素(0.4mL/kg体重)，记录在注射时间，操作如图： 正确抓兔 耳缘静脉 皮下注射 1.注射时，把兔子皮肤提起来，在褶皱处，竖着进针1.5-2cm。 2.注射完后等一会再把针头拔出。轻按注射部位。30 min后再采血。 错误抓兔 （5）取4支试管，按下表加入试剂: （6）混匀后，37OC水浴15min；取出冷却，空白管调零，505nm处比色测定。 标准 正常 注后 空白 血清样品 葡萄糖标准液 蒸馏水 酶酚混合试剂 – 0.02 – 3.00 0.02 – – 3.00 0.02 – – 3.00 – – 0.02 3.00 （4）注射后取血: 2-3ml,离心，取出备用。 (ml) 标准 正常 注后 A 血糖检测结果记录 计算： 1.注射前、后的血糖浓度 2. 注射后血糖浓度增高率 A肾 - A正 A正 × 100% 增高率 = C测 A测 A标 × C标 = （mmol/L） 家兔血糖正常参考值（5.34-6.62 mmol/L) 2.班氏定性试验：价廉，操作简单，比较常用，但易受尿中还原性物质干扰。 尿糖测定 班氏定性试验原理： 根据沉淀显色的深浅，对尿糖作半定量检测。 (CHOH)n CH2OH + + 4OH- (CHOH)n CH2OH + + H2O 2CuOH H2O + 黄色 碱性 葡萄糖 葡萄糖酸 红色 COOH 2CuOH CHO 2Cu2+ Cu2O 煮沸 分解 操作步骤 A尿2滴 B尿2滴 再煮沸5min 班氏剂20滴 班氏剂