普通免疫学-6-2013-单克隆抗体概述.ppt

普通免疫学(Immunology) 抗体制备与抗原抗体反应及应用 抗体的制备（多克隆与单克隆抗体） 基因工程抗体的制备 主要的抗原抗体反应 免疫学在生物学中的应用 抗体的制备（多克隆与单克隆抗体） 抗原上那部分可以引起机体产生抗体的分子结构，叫做抗原决定簇。一个抗原上可以有许多不同的抗原决定簇，因而使机体产生许多不同的抗体。 抗体的制备（多克隆与单克隆抗体） 抗原上那部分可以引起机体产生抗体的分子结构，叫做抗原决定簇。一个抗原上可以有许多不同的抗原决定簇，因而使机体产生许多不同的抗体。 多克隆抗体具有异质性：如何表示？等电聚焦实验能揭示多克隆抗体中的各种抗体具有不同的等电点。 等电聚焦实验： 蛋白质在pH梯度胶中电泳，每个分子沿着pH梯度迁移至电荷为中性的相应pH位置，并在此点积聚。 多克隆抗体通常用兔制备的 The immune response to an antigen generally involves the activation of multiple B-cells all of which target a specific epitope on that antigen. As a result a large number of antibodies are produced with different specificities and epitope affinities these are known as polyclonal antibodies. 用包含多种抗原决定簇的抗原物质免疫动物，从而刺激多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。因此，所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物，称为多克隆抗体(polyclonal antibody，pAb)，可以制作“生物导弹”。 另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，也称为多克隆抗体。 抗血清的缺陷： 每一种抗血清都不同于其他任何的抗血清，即使选用遗传背景完全相同的动物，采用相同的抗原制剂和相同的免疫程序。 产生的抗血清只能是有限的数量，因此同一份血清制剂不可能长期使用或完成一系列复杂的实验或临床检测。 即使是用亲和层析技术纯化的抗体也可能包含少量引起交叉反应的抗体，干扰对实验的分析。 发展一种无限量能产生结构均一且已知特异性的抗体分子方法。 1975年Kǒhler和Milstein首先报道用细胞杂交技术使经绵羊红细胞（SRBC)免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立起第一个B细胞杂交瘤细胞株,并成功地制得抗SRBC的单克隆抗体（monoclonal antibody, McAb）。迄今世界已研制成数以千计的McAb。 for theories concerning the specificity in development and control of the immune system and the discovery of the principle for production of monoclonal antibodies Jerne Kǒhler Milstein The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1984 由一种克隆产生的针对一种细胞表位的特异性抗体叫做单克隆抗体。 Monoclonal antibodies represent a single B lymphocyte generating antibodies to one specific epitope. 单克隆抗体为单一种B细胞克隆所产生的一种均一的免疫球蛋白，是一种独特型的抗体。它的特异性是针对一个抗原决定簇的。 单克隆抗体的原理 骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，因此能在体外长期培养，但不能分泌特异性抗体； B淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖，因此不能长期培养。 免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。 在制备杂交瘤过程中的一个问题是什么？ 如何解决？ 让未成杂交瘤的骨髓瘤细胞和脾脏细胞去死 HAT培养基[含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)]中