优质课微生物的实验室培养详解.ppt

巴斯德 练习 细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（ ） A.接种针、手、培养基 B.高压锅、手、接种针 C.培养基、手、接种针 D.培养基、手、高压锅 变形题 培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是（ ） ①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线消毒 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法 A. ⑤③②①④⑥ B. ①②③④⑤⑥ C. ⑥②③④①⑤ D. ③④②①⑥⑤ 思考3 ①溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热? ②加琼脂的目的是什么? 思考4 ①在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？ * 法国，微生物学家 失败的原因：发酵物中混入了杂菌 一.培养基 微生物 原核类: 真核类 非细胞类： 细菌、蓝藻等 酵母菌、霉菌、食用菌等 真菌： 原生生物： 草履虫、变形虫等 病毒 是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称． 关于微生物的类群 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 一、培养基的概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养物质——培养基 思考：微生物“吃”什么？ 一、培养基的成分： 微生物生存的环境和营养物质 ⑴碳源（提供碳元素的物质） 无机碳源： 有机碳源 CO2、碳酸盐 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源（提供氮元素的物质） 无机氮源： 有机氮源： ：（葡糖糖、蔗糖、淀粉、牛肉膏、蛋白胨等） 牛肉膏、蛋白胨等 NH4＋、NO3- N2 (3).不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 (参考教材附录内容) (5)另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气等的要求。 (4).不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、 无机盐——基本成分 （1）按培养基的物理形态分： 液体培养基 半固体培养基 固体培养基 一、培养基的种类 （2）按培养基的功能分： 基础（通用）培养基 选择培养基 鉴别培养基 （3）按培养基的化学成分分： ·天然培养基 ·合成培养基 二、无菌技术 1. 概念 无菌技术又称无菌操作，泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 因此，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵 消毒 　使用较为温和的物理或化学方法，杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。 2.消毒与灭菌 灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 (1)定义 ①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。 ②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮15min。 ③化学药剂消毒法：用75%酒精等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。 ④紫外线消毒。 ⑴.消毒的方法： 2.常用的消毒与灭菌的方法 ①灼烧灭菌 ②干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。 ③高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min. ⑵.灭菌的方法： 二、无菌技术 （1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 （2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 （3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 （4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面 思考：1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 思考：2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 （1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 C A （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算：（根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制100ML的培养基时，各种的成分的用量） 定溶至1000mL 水 20g 5g 10g 5g 重量 琼脂 NaCl 蛋白胨 牛肉膏 物质 2.称量 三、实验操作 思考：该培养基从物理性质分属于哪种？原因？含有几种基本营养成分？牛肉膏提供上述哪几种成分？ 准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动