基础学习实验1-高锰酸钾吸收曲线绘制双缩脲法测定蛋白质剖析.ppt

高锰酸钾吸收曲线绘制 双缩脲法测定蛋白质 蛋白质各种定量方法优缺点的比较 综合性设计性实验-1 此实验共包括如下三个部分1. 第一部分：高锰酸钾吸收曲线绘制2. 第二部分：双缩脲法测定蛋白质3. 第三部分：蛋白质各种定量方法优缺点的比较 试剂使用规则 使用试剂前应该仔细辨认标签，看清名称及浓度，是否为本实验所需。 取出试剂后，立即将瓶塞盖好，放回原位；未用完的试剂决不可倒回原瓶。 取标准溶液时，应该将标准溶液倒入干试管中，再用干净吸管吸取标准液，以免污染瓶中的标准液体。 使用滴管时，滴管尖端朝下，避免试剂流入橡皮帽内。 使用有毒试剂及强酸强碱时，尽可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。 吸量管的使用 正确拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端。 移液管的使用：使用时应根据需量取的液体体积，选用能一次吸取即可的最小规格的移液管，以减少误差，如用5 ml移液管吸取4.5 ml蒸馏水，用0.5 ml的移液管吸取0.5 ml 0.0125%的高锰酸钾溶液。取液：用吸耳球吸取液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上端。 调刻度：吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。 吸量管上端标有“吹”字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶液。此类吸量管为“吹出式”，未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留液体，0.5ml 以下的都要吹。 吸量管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管及试剂。 吸取血液、尿、组织样品、粘稠试剂或有颜色的吸量管，用后应及时用自来水冲洗干净。如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水冲洗干净，晾干备用。 吸量管的使用注意事项 一般玻璃仪器：如试管、烧杯、锥形瓶等，先用自来水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自来水反复冲洗，最后用蒸馏水淋洗2～3次，干燥备用。 容量分析仪器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自来水冲洗，待晾干后，再用铬酸洗液浸泡数小时，然后用自来水充分冲洗，最后用蒸馏水淋洗2～3次，干燥备用。 比色杯：用毕立即用自来水反复冲洗。洗不净时，用盐酸或适当溶剂冲洗，再用自来水冲洗。避免用碱液或强氧化剂清洗，切忌用试管刷或粗糙布(纸)擦拭。 上述所有玻璃器材洗净(以倒置后器壁不挂水珠为干净的标准)后，根据需要晾干或烘干。 玻璃器皿的清洗方法 分光光度法 光是一种电磁波，通常用频率和波长来描述光。 人的视觉所能感觉到的光称为可见光，波长范围在400～760nm，人的眼睛感觉不到的还有红外光（波长大于760-5000000nm）、紫外光（波长200-400nm）、X射线等。 在可见光区，不同波长的光呈不同的颜色，但各种有色光之间并没有严格的界线，而是由一种颜色逐渐过渡到另一种颜色。 溶液的颜色与吸收光颜色的关系 Beer-Lambert定律－吸收光谱法基本定律 描述物质对单色光吸收强弱与厚度和待测物浓度的关系。 含义：一束单色光通过溶液时，光能被吸收的程度与溶液的浓度和液层厚度成正比。 A＝KCL 或 lgI0/I =KCL A为溶液对光的吸光度，反映了物质对光的吸收程度； C为溶液浓度； L为溶液厚度； I0为照射待测物质的单色光强度，I为透过待测物质光线的光强度，透光度T= I/I0即溶液透过光的强度与入射光的强度之比； K为吸光系数，是物质在单位浓度和单位厚度的条件下对入射光的吸光度。 实验中溶液厚度不变，则A＝KC 光吸收示意图 I0 I b C 吸收光谱和物质的定性分析 物质的吸收光谱与物质分子结构有关。 吸收光谱曲线是物质的特征曲线。用各种不同波长的光线作为入射光测定物质的吸光度（Absorbance），然后以波长（λ）为横轴，相应的吸光度（A）为纵轴，按结果作图，可得到该物质的吸收光谱曲线，这种曲线体现了物质对不同波长的光的吸收能力。 在一定的温度、pH值等条件下吸收光谱的曲线形状是一定的。在吸收光谱中，往往可找到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（λmax）。物质不同，它们的最大吸收波长也往往不同。 不同浓度的VitB12溶液对相同波长的光的不同吸收 μg/ml A λ＝ 550nm 原理：根据物质对于入射光的特征吸收，可应用于物质溶液的定性检测 比较吸收光谱曲线：在相同的条件下，吸收光谱曲线不同，表明物质的化学结构不同。 比较最大吸收波长：不同物质的最大吸收波长不同；化学结构相似的物质最大吸收波长相同，吸收系数不同。 比较吸光度