体外肿瘤药敏试验方法研究进展详解.doc

体外肿瘤药敏试验方法研究进展 甘萍 治疗肿瘤的方法主要有3种，包括肿瘤化疗、放疗、手术。其中肿瘤化疗在消灭微小肿瘤转移灶和手术切除后的残留肿瘤细胞治疗中有着手术与放疗无法达到的显著优势，但肿瘤化疗中仍有许多问题：肿瘤病人个体间对化疗药物敏感性差异大；肿瘤对化疗药物有耐药性；化疗药物对许多类型的肿瘤特别是实体瘤的有效率不高；化疗药物的选择性差，毒性大，杀伤癌细胞的同时也杀伤正常细胞，给病人机体造成较大的损害。对于上述出现各种问题在临床上经验的化疗用药是无法保证肿瘤患者的个体有效性，因此个体化化疗在临床肿瘤化疗中就显得尤为重要。目前公认的较好的方法就是做肿瘤化疗药物敏感性试验简称肿瘤药敏，该方法的特点是直接从患者体内获取新鲜的肿瘤组织进行首次培养，由于肿瘤细胞刚刚离体，生物学性状尚未发生大的变化，能较真实地反映整个肿瘤细胞群体的特性及不同供体的个体差异，能够比较确切地代表体内状态，为不同的病人准确筛选敏感的化疗药物,并确定其剂量，真正实现临床的个体化用药，以提高化疗的靶向性，减少化疗药物的不良反应，降低细胞耐药性，成为肿瘤治疗中迫切需要解决的问题。 目前，预测肿瘤药敏的方法已发展为体内和体外两大系列0多种药敏试验并不断地朝着简单、快速、敏感、筛选作用方式不同的药物与临床有良好的相关性的方向迈进。而本文针对体外肿瘤药敏试验方法进行。 人体肿瘤细胞集落测定 它是利用肿瘤细胞悬液，置于双层琼脂中培养通过选择性加入化疗药物培养后，计数细胞繁殖形成的集落数目，再评估肿瘤细胞对该药的敏感性。该法的优点敏感、直接评价细胞增殖死亡。缺点：用于临床标本检测率低、周期长、集落计数繁琐。 放射性标记代谢物前体掺入法3H-Tdr assay) 该法利用氚标记的胸腺嘧啶核苷和尿嘧啶作为核酸代谢物前体，测定一定时间内放射性标记的代谢物前体掺入的多少来判断药物对细胞增殖活性的抑制作用。该法的优点操作简便、所需时间短、灵敏度高、重复性好，临床相关性与集落形成法相近可适用于绝大多数恶性肿瘤。缺点存在放射性污染，只能用于标记指数5%的样品，显然无法测出药物对G0期细胞的杀灭作用，而且胸腺嘧啶池的大小也可影响结果，故标记指数的变化不一定系抗癌药所致。此外，同位素的放射性也限制了它的应用。 快速荧光分析法FMCA) 它是采用一些特殊的荧光染料荧光素二乙酸酯对细胞的特定成分进行染色或标记，或者通过细胞酶使无荧光性的材料分解或换成荧光材料，通过测定荧光强度而测出活细胞数量。活细胞中水解酶可将双醋酸根荧光素水解为荧光素发出荧光，测定荧光的强度可反映培养体系中活细胞的数目。该方法的优点在于：成功率为80%~95%细胞用量，半自动的终点测定法利于多种药物不同浓度的检测，尤其对于乳腺癌及易污染的胃肠道癌症的体外药敏成功率高；测定范围宽细胞数在之间时，荧光强度F1)与活细胞数都能呈很好的线性关系；荧光分析法毒性低，能重复测定并可区分恶性肿瘤细胞和正常细胞，使临床抗肿瘤药物得以定量监测；荧光分析法重现性好，此法所依赖的水解酶一般比较稳定。缺点是仪器要求高，且需专业人员操作；由于荧光猝灭现象存在，使测定过程变得复杂。 MTT比色法 四甲基偶氮唑盐methyl-thiazolyl tetrazolium，MTT可被活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶还原为蓝紫色的甲臜formazan)，甲臜的形成量与细胞的活力成正比，用比色法测定甲臜的量以判断药物对肿瘤细胞的杀伤程度。该法特点简便；快捷，1周内可完成；经济，临床应用广；测定结果反映了所有的肿瘤细胞增殖期及静止期，适用于所有肿瘤类型；与临床相关性好；所需样本量适中×105～5×105个细胞孔；⑦为肿瘤药敏的常规方法。缺点甲臜结晶的溶解度差。检测到的是活细胞不能区分正常细胞和肿瘤细胞因此当应用于高度不均一的临床肿瘤组织时难以准确反映药敏结果所需细胞数较多所测数据变异较大(抑制率分析变异系数在% ～30 % )，结果不稳定。 5 三磷酸腺苷法ATP) 三磷酸腺苷ATP)是活细胞代谢的主要能量来源细胞死亡时，ATP在酶的作用下迅速水解，因此活细胞中ATP含量较死亡细胞含量高，通过测定癌细胞内ATP水平，了解抗癌药物敏感度。优点：重复性好，成功率可达90%~96%。ATP法能体现药物对整个肿瘤细胞群的杀伤作用，试验周期较短，所需细胞数量少、快速、简便，是一种很有前景的体外药敏试验。同时也适用于G期细胞药敏分析。缺点：测定仪器昂贵约15万元、无法排除非癌细胞干扰等。 6 染料排斥法(又名：区别染色细胞法differential staining cytotoxicity assayDISC) 该法利用快绿使短期培养4 d)的死细胞着色，同时加入鸭红细胞作为内计数标准，以药物处理组与对照组残存肿瘤细胞的比值作为评价药物敏感性的指标，以残存肿瘤细胞小