微生物的分离与培养技术原理及其应用.ppt

90mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 【样品稀释】 * 2016届高三生物二轮复习 一、培养基的营养构成与类型划分 加入某种指示试剂 加入某种化学物质 用途 功能 分离、纯化、鉴定、计数 成分明确已知 工业生产 成分不明确的天然物质 天然 培养基 化学 成分 工业生产 不加凝固剂 液体 培养基 观察微生物运动 半固体 培养基 加凝固剂如： 物理 性质 用途 制备方法 培养基 种类 划分依据 营养构成 水、无机盐、碳源和氮源 还要满足特殊营养物质（生长因子）、氧气以及温度、PH要求。 固体培养基 琼脂 分离、纯化、鉴定、计数 合成培养基 选择培养基 鉴别培养基 分离筛选特定微生物 鉴别不同微生物 大肠杆菌菌落呈现黑色,，带有金属光泽 伊红美蓝培养基 一般培养基 大肠 杆菌 纤维素分解菌 尿素 分解菌 鉴定原理 鉴别培养基 选择培养基 需分离微生物 尿素作为唯一氮源 酚红指示剂 细菌合成的脲酶将尿素分解生成氨。使培养基的碱性增强，pH升高，指示剂变红 纤维素作为唯一碳源 刚果红染色法 刚果红与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素复合物不能形成（或红色消失），培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。 四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂培养基上的黑色带金属光泽的菌落 二、 操作技术 ——微生物分离培养成功关键（消毒与灭菌） 1、实验操作者双手： 2、接种环、接种针或试管口、瓶口： 3、锥形瓶、培养皿： 4、培养基： (不能采用干热灭菌) 无菌 70%酒精消毒 灼烧灭菌 干热灭菌和高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 高压蒸汽灭菌 【例题1】为了获得β-胡萝卜素产品,某小组开展了产β-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题： （1）实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是 ；为了防止冷凝水渗入及减少灭菌后器皿或培养基被污染，灭菌前应该 。 (2)为了筛选出酵母菌,培养基中添加了青霉素，其目的是 。 干热灭菌和高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 牛皮纸或几层报纸包扎紧 抑制细菌生长 高压蒸汽灭菌锅 压力表 安全阀 放气阀 灭菌桶 排气软管 【例题1】为了获得β-胡萝卜素产品,某小组开展了产β-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题： (3)右图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙依次是 。(填序号) ①安全阀、放气阀、压力表 ②放气阀、安全阀、压力表 ③安全阀、放气阀、温度表 ④放气阀、安全阀、温度 ① 【例题1】为了获得β-胡萝卜素产品,某小组开展了产β-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题： （4）为了将分离到菌株纯化,挑取菌落在3块相同平板上划线,结果其中一块平板各划线区均未见菌生长，最可能原因是 。 （5）为增加β-胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是 ；研磨时 (填“需要”或“不需要”) 添加CaCO3，理由是 。 接种环温度过高，菌被杀死 研磨充分 不需要 β-胡萝卜素较耐酸（较稳定） 计算 大肠杆菌的分离纯化培养 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ?称量 ?溶化(调节PH) ?灭菌 ?倒平板（50℃） 倒平板（50℃） 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；使培养基表面的水分更好地挥发 平板倒置 平板冷凝 打开一条缝隙 倒平板（50℃） 大肠杆菌的分离纯化培养 （二）分离纯化大肠杆菌 方法一、平板划线法 方法一、平板划线法 单菌落 丙 甲 乙 （一）系列稀释操作 101 102 103 104 105 106 移液管 移液管吸取菌液稀释时，轻压橡皮头，吹吸三次的目的是？ 使菌液与水充分混匀 方法二、稀释涂布