8药品生物检定技术.ppt

细菌、霉菌计数 五、药品的微生物限度检验方法 （一）细菌、霉菌及酵母菌计数 2.供试品检查方法 （2）薄膜过滤法 所用滤膜孔径不大于0.45μm，直径一般为50mm。 取相当于每张滤膜含1g 、1ml或10 cm2供试品的供试液（或适宜稀释级的供试液1ml），加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。用pH 7.0无菌冲洗液冲洗滤膜后，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养，培养条件和计数方法同平皿法。每种培养基至少制备一张滤膜。根据菌数报告规定计数，如超过规定限量即可认定不合格。 同时取试验用的稀释液1ml同法操作，作为阴性对照，阴性对照不得有菌生长。 五、药品的微生物限度检验方法 （二）控制菌检查 检查非规定灭菌制剂中是否存在有可疑的致病菌 控制菌检查项目包括大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌及白色念珠菌。 五、药品的微生物限度检验方法 （二）控制菌检查 1.适用性检查 适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查 促生长能力检查用以保证在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间内，试验菌生长良好（液体培养基）、菌落大小、形态特征与对照菌一致（固体培养基） 抑制能力检查用以保证其他试验菌无法生长 指示能力检查用以保证培养基上试验菌的生长情况（液体培养基）、菌落大小、形态特征（固体培养基）、指示剂反应情况等与对照培养基一致 五、药品的微生物限度检验方法 （二）控制菌检查 2.方法验证试验 控制菌检查方法的验证试验 用以保证方法中供试液没有抗菌活性、所采用方法适合于该产品的控制菌检查 五、药品的微生物限度检验方法 （二）控制菌检查 3.阳性对照试验和阴性对照试验 试验菌的阳性对照试验：应检出相应的控制菌 稀释液的阴性对照试验：应无菌生长 五、药品的微生物限度检验方法 （二）控制菌检查 4.控制菌检查法 （1）大肠埃希菌 检查法：取供试液在胆盐乳糖培养基的培养物0.2ml，接种至含5ml 4-甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外线下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。若管内培养物呈现荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。 五、药品的微生物限度检验方法 （二）控制菌检查 4.控制菌检查法 （2）大肠菌群 在乳糖胆盐发酵培养基管中，分别加入1∶10、1∶100、1∶1000的供试液1ml，用稀释剂1ml作为阴性对照，均培养18～24小时，观察结果 五、药品的微生物限度检验方法 （二）控制菌检查 4.控制菌检查法 （3）沙门菌 检查法：取供试液在营养肉汤培养基中的培养物1ml，接种于10ml四硫磺酸钠亮绿培养基中，培养18～24小时后，划线接种于胆盐硫乳琼脂（或沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基平板上，根据培养后平板上有无菌落生长、或生长的菌落形态特征，判断是否检出沙门菌。如菌落形态特征相符或疑似，还应通过用三糖铁琼脂培养基高层斜面进行斜面和高层穿刺接种试验做进一步判断。 五、药品的微生物限度检验方法 （二）控制菌检查 4.控制菌检查法 （4）铜绿假单胞菌 检查法：取供试液在胆盐乳糖培养基的培养液，划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上，根据培养后平板上有无菌落生长、或生长的菌落形态特征，判断是否检出铜绿假单胞菌。如菌落形态特征相符或疑似，还应通过氧化酶试验及绿脓菌素试验做进一步判断 五、药品的微生物限度检验方法 （二）控制菌检查 4.控制菌检查法 （5）金黄色葡萄球菌 检查法：取供试液在亚碲酸钠（钾）肉汤（或营养肉汤）培养基的培养液，划线接种于卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上。根据培养后平板上有无菌落生长、或生长的菌落形态特征，判断是否检出金黄色葡萄球菌。如菌落形态特征相符或疑似，还应通过血浆凝固酶试验做进一步判断 第三节 抗生素效价的微生物检定法 抗生素微生物检定法 在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。 《中国药典》现行版：管碟法和浊度法 一、检定原理 标准品溶液和供试品溶液 量反应平行线原理：在相同试验条件下，标准品溶液和供试品溶液对试验菌所得的量反应曲线，在一定剂量范围内互相平行 检定方法 管碟法：二剂量法、三剂量法 浊度法：二剂量法、三剂量法、标准曲线法 二、试验菌 管碟法试验菌： 枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、大肠埃希菌、啤酒酵母菌、肺炎克雷伯菌、支气管炎伯德特