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微生物学答疑 绪论 2、什么是微生物学？研究内容是什么？ 微生物学是研究微生物生命活动的科学。其研究内容涉及微生物的类型、成分、结构、新陈代谢、生长繁殖、遗传、进化、分化等生命活动的各个方面，以及微生物与其它生物和环境的相互关系等。 4、什么是微生物？包括哪些类群？ 微生物是指所有形体微小、无细胞结构或个体结构较为简单的低等生物的统称。微生物包括无细胞结构的病毒、类病毒、朊病毒等；原核细胞的细菌、放线菌、蓝细菌、立克次氏体、衣原体、支原体等；真核生物的真菌、单细胞藻类和原生动物等。 8、请设计一个实验，能够彻底否定“自生说”。 无菌培养基、无菌培养无微生物产生，而同样条件下非无菌有微生物产生。 第二章 微生物的纯培养和显微技术 1、解词：冰冻蚀刻技术 首先将标本在标本台上于-100℃的冰中或-196℃的液氮中超低温冰冻，然后用冰刀将冻结的标本骤然断开。温度上升后，冰在真空中迅速升华，断裂面上的结构得以暴露，然后喷涂上一层蒸气碳和铂，组织溶掉后，把喷涂的碳和铂的膜剥离下来，置电镜下观察。 2.写出三种获得微生物纯培养的方法，并叙述其原理。 平板划线分离法：在平板上通过接种环与培养基不断接触而把菌体稀释从而得到单菌落； 稀释涂布平板法：将菌悬液稀释，然后取少量加到平板表面，再用涂棒将菌悬液涂布，使菌体均匀分布在平板表面，经培养后获得单菌落； 稀释倾注平板法：将菌悬液稀释，加到空培养皿中，倒入融化冷却的50度以下的凝固培养基，将培养基与菌悬液混合均匀，培养后获得单菌落； 显微操纵仪挑取法：用显微操纵仪直接将单个细胞挑到培养基中经培养获得单个细胞的培养物； 4、用普通光学显微镜观察标本，如何增加物象和视野的反差？ 首先，标本要染色；观察时，可通过增加进入视野中光线、扩大环状光圈、提高聚光器等增加视野的亮度；而增加物象和视野的反差，要根据标本厚度、透光率和物镜放大倍数等灵活进行。一般低倍物镜观察物象时，进入视野中的光线强，可通过调节进入光线、缩小环状光圈、降低聚光器等调节反差。高倍物镜则要相应地增加进入视野中的光线，得到适当的反差。使用油镜时，一般把聚光器升到最高，充分打开环状光圈等措施，进入视野中的光线较多。 暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显微镜在生物学研究中有什么作用？ 暗视野显微镜可用来各种死活酵母细胞的死、活鉴别，对于梅毒螺旋体等娇弱微生物的观察也特别有用。相差显微镜可用以观察活细胞或未染色标本，能更清晰地观察活细胞的细微结构。荧光显微镜在免疫学、环境微生物学和分子生物学中应用十分普遍。 6、扫描电子显微镜有什么特点？ (1) 可以观察直径大到 30mm 的大块试样，制样方法简单。(2) 场深大。三百倍于光学显微镜，适用于粗糙表面和断口的分析观 察；图像富有立体感、真实感、易于识别和解释。(3) 放大倍数变化范围大，一般为 15 ～ 200000 倍，最大可达 10 ～ 1000000 倍，对于多相、多组成的非均匀材料便于低倍下的普查和高倍下的观察分析。(4) 具有相当的分辨率，一般为 2 ～ 6nm ，最高可达0.5nm 。(5) 可以通过电子学方法有效地控制和改善图像的质量，如通过调制 可改善图像反差的宽容度，使图像各部分亮暗适中。采用双放大倍数装 置或图像选择器，可在荧光屏上同时观察不同放大倍数的图像或不同形 式的图像。(6) 可进行多种功能的分析。与 X 射线谱仪配接，可在观察形貌的同时 进行微区成分分析；配有光学显微镜和单色仪等附件时，可观察阴极荧 光图像和进行阴极荧光光谱分析等。(7) 可使用加热、冷却和拉伸等样品台进行动态试验，观察在不同环境 条件下的相变及形态变化等。 菌种保藏的原理是什么？举出三种常用的菌种保藏方法，并说明其操作过程。 菌种保藏最好保藏微生物的分生孢子、芽孢等休眠体；其次要创造一个诸如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及填加保护剂或酸度中和剂等有利于细胞长期休眠的良好环境条件，使微生物存活但保持微弱的生活力，达到保藏的目的。 常用的方法：定期移植保藏法，液体石蜡保藏法，沙土管保藏法，麸皮保藏法，甘油保藏法，冷冻干燥保藏法，液氮保藏法等。 9、 微生物学操作的无菌技术有哪些内容？ 无菌技术是指分离、转接及培养微生物时防止其被其他微生物污染的技术，是保证微生物学研究正常进行的关键。无菌技术主要包括：一、微生物培养的常用器具要灭菌，试管、培养皿、三角瓶等等器具使用前必须灭菌，使容器内不含任何微生物；试管、三角瓶等与外界有沟通的口子要用棉塞等塞口。二、接种、培养要注意无菌操作，接种操作始终在无菌环境中进行，培养环境要清洁，各种与微生物接触的接种器具要无菌。 微生物细胞的结构和功能 一、细菌、故生菌和真核微生物部分 1、解词： 原生质体：人为地除