显微与电镜技术分析.doc

生物显微技术与电镜技术 目录 生物显微制片技术 概论 制片的目的和任务 生物制片的分类法 生物显微制片的步骤和原理 取材和固定 洗涤和脱水 透明和透明 浸透及包埋 切片 贴片脱蜡与染色 封固 其它切片法 冷冻切片法 火棉胶制片法 显微照相术 显微镜 显微镜的种类 显微镜的光学原理 显微镜的使用及其注意事项 各种显微镜 显微镜几种常用的附件 游标尺的使用 显微测微尺 描绘器 投影屏和投影目镜 共览装置 显微照相术 不同类型的显微照相装置及其功能 显微照相对物镜、目镜及聚光镜的选择 照相的程序 电子显微技术 概论 电子显微镜的原理和结构 电子显微镜的原理 电子显微镜的结构 扫描电子显微镜 扫描电镜的一些基本概念 扫描电镜的原理及特点 电镜生物样品的制备 透射电镜生物样品的制备 ------超薄切片的方法 扫描电镜生物样品的制备 附录一 制片技术实例 实验一 涂布法 实验二 石蜡切片法（一） 实验三 石蜡切片法（二） 实验四 透射电子显微镜生物标本的制备方法 实验五 扫描电子显微镜样品的制备方法 生物显微制片技术 概论 制片的目的和任务 制片技术是生物科学必不可少的研究手段。人类生活在大自然中，虽很早就认识和研究自然界中形形色色的生物，但起初只限于在外部形态、种类以及生长发育等方面的研究，对于内部细微结构的奥秘，直到十七世纪中叶发明了显微镜后，才开始借助工具进行探索。当时限于工具的简陋及科学发展的水平，观察和研究的方法是十分简单的，到了址九世纪，由于工业革命促进了物理学和化学的发展，进而为显微技术革新的发展提供了丰富的知识和新技术装备，使显微技术产生了根本性的变化。制片技术就是在这样的基础上形成为一门新的学科，从而推动生物科学和日益发展。当然，生物科学迅速发展，也要求投影片技术的内容更加充实和完备，以达到各种观察和研究的目的。 由于各种材料的性质及观察研究的目的不同，要制成适合于显微镜下观察的薄片，并要显示出结构的正确的清晰，因而产生了多种制作生物制片的技术和方法。如平时观察细小透明的生物体或组织材料，可无需经切片手续，只需封在一滴水中就能在显微镜下进行观察；对易于分离的组织，可在载波片上涂上一层薄层，经染色或不染色做成涂片；大而复杂的材料，可以用刀或用切征机切成薄片；若要进一步研究其细微的结构，尚须经过若干制片步骤；为了显示组织间更加清晰的结构，还可进一步染色等等。总之，制片方法是极其繁多的，而且仍在不断地发展和充实。 由于制片技术在生物科学的领域内占有重要的地位，因此已成为生物学工作必须掌握的一项技术，也是水产养殖学科不可或缺的基本研究手段之一。本篇以石蜡制片技术为主线来阐述制片的基本方法和原理，在掌握基本方法和原理的基础上，其他生物制片法则可融会贯通，以便在工作中达到灵活应用的目的。 第二节生物制片的分类法 生物制片的种类，从不同的角度出发其分类是不一的，如从保存时间的长短可分为“临时制片”和“永久制片”两大类，而目的常根据其制片的方法来分，采用如下的分类方法： 活体观察 将生物的个体或其一部分，就其原来的状态置于载波片上，加上一滴水和盖波片进行镜检，从而达到预定的检查目的。此法既简便而且又节省时间，并能观察到活体的情况，也不需要什么特殊的设备，但因此法未经过其他处理，常常因组织过厚，光线不易透过，且活体材料又多为无色透明的，结果常难取得满意的效果，同时不易作长期的保存。 切片法即是利用锋利的刀具将材料切成薄片。简便的切片法即是利用刀片或剃刀将材料切成薄片后，置于载玻片上加盖进行活体观察；或经处理、染色等步骤做成制片，此法可制成临时制片，必要时亦可制成永久制片。该切片法在制片技术中甚为重要，因为无需特殊设备便能及时地观察到生活组织的内部结构。另处，有些研究有必要先作简单切片进行观察，才能决定材料是否符合目的和要求。完善的切片法如石蜡切片法，火棉胶切片法等，需要经过一系列的过程和各种药剂，染色剂处理，手续甚为复杂，而且要有一定的设备，这些方法由于经过了各种处理，使组织内所含万分发生物理和化学的作用，而显示其差异，以便于观察和研究，同时可用长时间的保存。因此，切片法在生物显微片技术中占有极其重要的地位。 非切片法 所谓非切片法，即是指不经切片手续，但其不同于活体观察法之点是：此法常经过药剂的处理，这样组织常被杀死后并经染色做成临时或永久制片。或包括： 整体封藏法：用这种方法制片，一般是身体很小或自身为一薄片的低等动物，如无脊椎动物的水螅、草覆虫等。或脊椎动物胚胎材料：如鸡胚、蛙胚、猪胚等。也可取下某一动物体的某部分器官制成封片的，如昆虫的翅、鸟的羽毛、鱼的鳞片等等。这些材料取下后经固定、脱水、染色