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VYSIS说明书 试验程序原理 21 黄 Y 黄 X 绿 在原位杂交X绿光探针centromerregion是一种在一个细胞标本里能看见特定的核酸序列(尤其是DNA)的技术， (FISH) 包括精确的单股荧光标记DNA探针的退火 与目的基因互补. 探针荧光的DNA 位点能通过直接的检测用荧光显微镜看到。 羊水标本包括间期细胞用标准的细胞遗传学方法附着在玻片上。 样本标本DNA变性，然后与 CEP x/y and LSI 21 探针杂交。 在杂交后，多余的和未结合的探针被一系列洗涤所除掉。 染色体和核DNA用特殊的染料被复染，复染剂 DAP发蓝光. 用装上适合的激动剂与发射滤器的荧光显微镜观察 CEP X/Y 和 LSI 21 DNA 探针杂交，能看到强烈的橘黄光和绿色的荧光信号和蓝色的复染核。 通过显微镜检查 21 X, and Y染色体点计，荧光染色区域明亮地突出于核的DNA普通的蓝色荧光(通过DAPI复染) . FISH 程序能使核的 21,X,and Y染色体点计可见。 CEP X/Y DNA 探针是一种绿光和橘黄光混合物，直接标记荧光的DNA探针，分别在X和Y染色体的DXZ1 和DYZ3 区。 LSI 21 DNA 探针是一种橘黄色光直接标记的荧光DNA 探针，包含特异性 DNA 序列对应位于21号染色体21q22.13 到 21q22.2 区的D21S259 和D21S342 基因座. 所有探针混合物都在杂交缓冲液中经过了预变性以便于应用。 本试验设计目的是用荧光原位杂交法探测和量化21,X,and Y染色体 。 试剂和仪器 提供的材料 本试剂盒包括四种试剂，够约20次测试。 成分 组成 容量 储藏 LSI 21 DNA 探针:E.coli大肠杆菌质粒 (探针经过预变性 ) 橘黄光标记DNA 探针与阻断DNA 和杂交缓冲液预混合（右旋糖酐硫酸盐,甲酰胺， SSC） 200ul/ 小瓶(10ng/ul) -20℃ 避光 CEP X/Y DNA 探针(探针经过预变性 ) 绿光荧光标记X探针和橘黄光标记Y 探针，与阻断DNA 和杂交缓冲液预混合 （右旋糖酐硫酸盐,甲酰胺，SSC） 200ul/小瓶（15ng/ul －20℃避光 DAPI II复染剂 125ng/Ml DAPI在 苯二胺 二氢氯化物, ,甘油 和缓冲液中 600ul /1小瓶 -20℃避光 NP-40 去离子去污剂 4ml/ 2小瓶 －20到25℃ 20x SSC 氯化钠和柠檬酸钠 66g/ 1包装 同上 探针对照玻片男性，羊水细胞（正常） 固定的生物标本 得自正常男性羊水细胞加于玻璃显微镜玻片 5 片(10靶区) －20℃ 干燥 产前筛查阳性探针对照玻片。 固定的生物标本 得自人成纤维细胞系加于玻璃显微镜玻片 5slides（10靶区） 同上 储存和处理 储存未开封的试剂盒做为一个整体在 -20 ℃避光，避湿 . 20 x SSC 应单独储存于室温。 储存探针对照玻片在一个密封的容器中在-20℃，应用干燥剂防潮. 每一个未开封的试剂盒成分的失效日期标于独立的标签上。 这些储存条件适用于所有开封及未开封的组成部分。 需要但未提供的材料 实验室试剂 超纯甲酰胺 储存于 +4℃ 至多一个月（从收到起，具体看制造商的建议的详细信息） 浓缩盐酸(12N) HCL 1N 氢氧化钠 纯净水(蒸馏或去离子的or Milli-Q). 储存于室温中 carmoy’s 固定剂 (3:1 甲醇:醋酸) drierite干燥剂 1x 胰蛋白酶 /EDTA (0.05% 胰蛋白酶,0.53Mm EDTA -4Na 于 Hanks 平衡盐溶液中without Cacl2,Mgcl2.6H2O and M gSO4-7H2O) 0.56%氯化钾 实验室器械 荧光显微镜（装备建议的滤光器） 定相对照光学显微镜 预先清洁的显微镜玻片 玻片加温器(45 ℃-50 ℃) 22mm x22mm玻璃盖玻片 (1-10ul)微升消毒枪头 聚丙烯微离心管(0.5ml or 1.5ml) 定时器 磁力搅拌器 涡流微离心机 量筒 水浴(67±2℃ 和73±1℃) 空气孵化器恒温箱(37℃) 菱形头划线器 湿室 钳子（镊子） 无菌注射器(5ml) Coplin 缸(6) 建议型号 :wheaton 产品.No.900620 垂直染缸 PH 计和 PH 试纸 校准的温度计 金属试管架 橡胶粘固剂 0.45um 孔过滤器 显微镜器材和滤光器 显微镜 : 需要epi- 照明荧光显微镜观察荧光 ,应该检查以确定正确操作 一台显微镜判断适合的普通DNA 染色，如 DAPI propid