QC-MS-023-1 标准菌种管理规.doc

目的：制订本标准的目的是建立标准菌种的管理规程，对标准菌种进行确认，定期进行更新培养，并以适当条件保存，避免其它微生物之污染或菌种之老化。 依据：国家药品监督管理局《药品生产质量管理规范》（1998年修订）第四十四条、第七十五条。中华人民共和国卫生部《中国医学微生物菌种保藏管理办法》。 范围：本标准适用于QC实验室供微生物学检验用的标准菌种的管理。 责任：QC微生物学检验员对本标准的实施负责。 正文： 标准菌种的购入： 标准菌种应从卫生部菌种保存中心或其他法定实验室采购或引入。 由菌检员根据检验品种的需要，由菌检员填写申请购买单。内容：菌种名称、用途等。报QC负责人审核批准。 填写菌种保存管理记录。内容：菌种名称、来源、购买日期、形态特征、菌种传代次数、传代时间、传代者签名、培养基、培养条件、贮存条件、保存处等。在斜面试管外加贴标签，内容为名称、传代时间、代数。 传代代数的表示方法：分离次数—传代次数。如：0-3表示未进行分离时的第三次传代；2-2表示第二次分离培养后第二次传代。 菌种的保存及传代 定期传代及常用保藏法：将菌种每隔半个月接种在新鲜的斜面，按不同菌种规定的温度和时间培养后，再于专用5—12℃冷藏箱内继续保存，防止交叉污染。作好传代记录。 每天检查记录一次保存菌种的冰箱温度，菌种管的棉塞如有松动，或其他异常应及时销毁处理，并记录。 菌种如发现异常，应进行分离纯化，取得纯化菌种方可继续传代。 菌种的使用应有记录，带有菌种的培养基及器皿处理前均应加热灭活。 新购入的标准菌种呈冻干状态，应予以活化，经确认测试后，成为保存菌种。 当保存菌种发生变异，且无法从控制菌种中确认原菌种时，应立即采购或引入新菌株。 菌种活化：新菌种呈冻死状态，活化步骤如下： 以沾有70％酒精的棉花，擦拭冻干管的外管并且在火焰上加热外管尖端。 滴几滴水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。 取出隔热纤维和内管，以镊子取出内管之棉塞。 菌悬液的制备： 细菌菌悬液的制备：用无菌吸管，吸取0.3-0.5ml指定液体培养基，滴入内管内，并轻微振荡，停留约30分钟，使样品呈悬浮状。 霉菌及酵母菌菌悬液的制备：用无菌吸管吸取0.3～0.5ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解均匀后，以无菌吸管吸出，再滴入盛有无菌水的试管内，轻微震荡使其混合均匀后静置1小时。 取0.1～0.2ml之菌体悬浮液供适当的营养琼脂平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌玻璃棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌液则注入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养。 某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期较长，必需经过正常培养两倍时间后，才可认为不活化。新购买的菌株，应先冷藏于4～10℃冰箱中，切勿冷冻保存。 标准菌种的更新培养与保存： 每一保存的菌种应有一只以上存放於4～8℃冰箱中。 菌种的更新培养至少每月一次。 将保存菌种用白金接种环接入新鲜的增菌液中，适温培养24～48小时，或繁殖至适当浊度为止，原保存菌种仍保存作为控制菌种。 振荡繁殖后的增菌液，接种适量至数支斜面培养基上，于适温下培养 至菌落达希望大小为止。更新后的菌种，一只作保存菌种，其他可供日常测试用。 经更新使用后的控制菌种仍须保存三个月，经121℃蒸汽灭菌30分 钟后废弃。 每只保存菌种须标明菌名，统一编号号码及接种日期。 菌种确认： 每一菌种在更新培养后，取任一保存菌株做革兰氏染色，在显微镜下观察染色反应，菌体大小及外观是否正常。 所有菌种每半年必须进行一次鉴定测试。 若菌种呈现异常反应，则应立即从控制菌种中，找出具有典型反应的菌株，再行更新培养成为新保存菌种。 标准菌种的购入、确认、活化、更新培养与保存应记录。 附则： 本标准附图 0 幅，附表 1 张。 需要引用本标准的标准文件登记：标 准 菌 株 保 存 及 传 代 记 录 菌种名称 编号 来源 日 期 接种培养 保存 备 注 培养基 温度(℃) 时间(小时) 温度(℃) 使用期限至 编号：QC-MS-023 标准菌种管理规程 类别：管理标准 部门：QC 页码：第2页，