背景知识：糖和糖苷.ppt

The End * * * * * 七、糖的提取分离 ㈡分离 ⑵活性炭对物质的吸附规律 对分子量大的化合物吸附力大于分子量小的化合物，即：多糖 单糖 活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。洗脱顺序： H2O、10%、20%、30%、50%、70%乙醇液 无机盐 →二糖 →三糖 →多糖 单糖等 七、糖的提取分离 ㈡分离 2．纤维素色谱 原理与PC相同，属分配层析。 溶剂系统：水、丙酮、水饱和的正丁醇等。 用水溶性的溶剂如HAc：H2O进行展开时，其原理属吸附层析。 七、糖的提取分离 ㈡分离 3．离子交换柱色谱 ①除水提液中的酸、碱性成分和无机离子； ②制成硼酸络合物——强碱性阴离子交换树脂（不同浓度硼酸盐液洗脱） 七、糖的提取分离 ㈡分离 4．凝胶柱色谱 常用商品名称及型号： 葡聚糖凝胶（商品名：Sephadex G） G-10、G-15、G-200等 [10—表示吸水量乘以10，即1.0ml/g的吸水量] 琼脂糖凝胶（Sepharose，Bio-Gel A） 聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P） 羟丙酰基交联葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20） （亲脂性，可在有机溶剂中进行分离的分子筛） 七、糖的提取分离 ㈡分离 操作过程： 除LH-20外，均在H2O中进行。 ①将凝胶在适当的溶液中浸泡（多为洗脱剂）； ②待充分膨胀后装入层析柱； ③用洗脱液洗脱； ④收集、回收溶液，干燥。 七、糖的提取分离 ㈡分离 洗脱溶剂的选择： 分离中性物质——水及电解质溶液 （酸、碱、盐溶液及缓冲液） 阻滞较大的组分——水+有机溶液 （水-甲醇、水-乙醇、水-丙酮等） LH-20可用有机溶液进行溶胀（如：CHCl3、丁醇、二氧六环等） (适用：有机物质的分离，如：脂类、固醇类等) 七、糖的提取分离 ㈡分离 5．季铵氢氧化物沉淀法 季铵氢氧化物是一类乳化剂。 七、糖的提取分离 ㈡分离 6．分级沉淀或分级溶解法 在糖的水溶液中，逐步加入乙醇，即逐渐增大EtOH浓度，可得到各部分的沉淀物。 为使多糖稳定，多糖通常在pH=7时进行 酸性多糖在pH=2~4时进行 处理酸性多糖时，为防酸水解苷键，操作宜迅速。 七、糖的提取分离 ㈡分离 7．蛋白质除去法 用分级沉淀法得到的多糖，常夹杂有较多的蛋白质，为除之，通常选择能使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如：酚、三氯乙酸、鞣酸等。 注意：处理时间要短，温度要低。 （避免多糖降解） 三氟三氯乙烷法和Sevag法（用氯仿：戊醇或丁醇4：1混合）在避免降解上有较好效果。 七、糖的提取分离 ㈡分离 ㈢糖的提取分离实例 地黄根中单糖和低聚糖的分离 取鲜根→热EtOH、H2O提→阴阳离子交换树脂（除酸碱成分）得中性成分 活性炭柱（15%HOAc处理） 以H2O、稀EtOH（5、10、15、 25% 顺次洗脱）,经PC检定，合并 D-葡萄糖 D-半乳糖 D-果糖 蔗糖 棉子糖 甘露三糖 水苏糖(四糖) 毛蕊糖(五糖) 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 ㈠糖的鉴定 1．纸层析 展开系统：常用水饱和的有机溶剂展开。 如：正丁醇：醋酸：水（4：1：5上层）BAW 水饱和苯酚等溶剂系统。 显色剂：邻苯二甲酸苯胺、硝酸银试剂(使还原糖显棕黑色)、三苯四氮唑盐试剂（单糖和还原性低聚糖呈红色）、3,5-二羟基甲苯盐酸试剂（酮糖呈红色） 等。 糖的鉴定-纸色谱法： 　　展开剂以正丁醇-乙醇-水和水饱和的苯酚两种系统应用最为普遍。正丁醇醋酸水简称BAW系统，B代表正丁醇，A代表醋酸，W代表水。比例为4：1：5的上层溶液。 糖类的纸色谱常用显色剂有：硝酸银试剂；三苯四氮唑盐试剂；苯胺-邻苯二甲酸盐试剂；3，5-二羟基甲苯-盐酸试剂;过碘酸加联苯胺试剂等。 　　在用纸层吸来进行分离，最常见的糖是葡萄糖和鼠李糖，这两个糖Rf值的大小一般的规律是，鼠李糖因为极性小于葡萄糖，在用纸色谱检识时，鼠李糖的Rf值一般大于葡萄糖。不同的糖Rf值的大小都会有比较大的差别。 　　常用显色剂有：硝酸银试剂，使还原糖显棕黑色；三苯四氮唑盐试剂，使单糖和还原性低聚糖呈红色；苯胺一邻苯二甲酸盐试剂，使单糖中的五碳糖