遗传毒性试验123幻灯片.pptVIP

阴性 S1 阴性 S1 S2 S2 S3 S3 阳性 阳性 -S9+S9 -S9阳性对照为甲磺酸甲酯 +S9阳性对照为环磷酰胺 秋水仙素处理，收细胞，制片 消化细胞后加含血清培养液，以1200 r/min离心7min，弃上清。 加入0.075mol/L氯化钾溶液7ml，于37℃水浴低渗处理7min，加入2ml固定液，以1500r/min离心5min~7min，弃去上清液。 再加入7ml固定液，固定7min，以1500r/min离心7min，弃上清。同法再固定1~2次，弃上清，加入数滴新鲜固定液自然干燥，用姬姆萨染液染色。 制片 结论判断 在光学显微镜下每一试验组选择100个分散良好的中期分裂相进行染色体畸变分析 染色体结构异常包括：裂隙、断裂、微小体，单体互换等 用χ2 检验或其他适当的显著性检验方法，对所得试验数据进行统计学处理。当各剂量组与阴性(溶剂)对照组相比，畸变细胞率的增加有显著性意义，并有剂量-反应关系时； 或仅一个剂量组有显著性意义的增加，并经重复试验证实时，可判为该受试物在本试验中具有致突变性。 当畸变率≤4.9%为阴性，5.0%~9.9%为可疑阳性，10%~19.9%为+，20%~49.9%为++，≥50%为+++ 注意事项 1.剧毒物质：敌克松、叠氮钠、2-蒽基芴、1,8-二羟基蒽醌、多氯联苯、甲磺酸甲酯 2.操作中，避免菌株的交叉污染 3.废弃菌液煮沸10min处理 4.低渗时间的把握 5.染色体结构异常的判断 扩项的实验设备和试剂 Ames实验 培养箱、水浴摇床、水浴箱、灭菌器、烘箱、普通冰箱、液氮灌、电子天平等 组氨酸、生物素、琼脂粉、氯化钠、柠檬酸、磷酸氢二钾、磷酸氢氨钠、硫酸镁、葡萄糖、牛肉膏、胰胨、氯化钾、氯化镁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、辅酶2、6-磷酸葡萄糖、氨苄青霉素、四环素、结晶紫、 体外哺乳动物细胞染色体 畸变 超净工作台、离心机、倒置显微镜等 甲磺酸甲酯、环磷酰胺、DMSO、秋水仙素、氯化钾、甲醇、冰醋酸、吉姆萨染料、甘油 谢谢！ 哺乳动物细胞染色体畸变和基因突变的替代试验：小鼠淋巴瘤细胞基因突变实验。替代原因： * 试验项目一般为企业规定 * Ames试验比较快速、简便、敏感、经济，且适用于测试混合物 * 用遗传学方法培植一种不能自行制造组氨酸的鼠伤寒沙门氏菌的变异体，这种菌株在无组氨酸的培养基中不能生长。如果将这种菌株与化学致癌物一起培养，则可使其DNA再次突变，恢复到能制造组氨酸的原型（野生型），即在无组氨酸的培养基中也能生长。利用这一特征性变化来测试化学物质有无致突变作用，并根据生长的菌落数目还可以判定其致癌性的强弱。 * g=M×mol * 周二上午配试剂，中午高压，下午倒平板，16个平板，从主平板中挑菌落，接种于营养肉汤培养基中，每个锥形瓶各5ml的培养基，于37℃，56rpm，到周三早上九点。摇菌时应用锡纸将锥形瓶包裹，然后在水浴摇床上加盖牛皮纸。 * 每组两个平行皿，48h观察 * 每组两个平行皿 * 每组两个平行皿 * 每组两个平行皿 * 每组两个平行皿，48h后观察。15w，距离33cm * 在倒放烘干的底层培养基上，迅速倒入含0.1ml菌液的顶层培养基，混匀固化。 * 平板数112，每皿大约20ml，大约8瓶300ml的底层培养基。 * 在倒放烘干的底层培养基上，迅速倒入含0.1ml菌液的顶层培养基，混匀固化。 * Ames试验比较快速、简便、敏感、经济，且适用于测试混合物 * 吉姆萨染料7.5g 甲醇和甘油个500ml，用时，取1ml吉姆萨染液，再加10ml水 * 遗传毒性试验 主要内容 1.遗传毒性试验 GBT16886.1-2001 持久表面粘膜接触类 持久损伤表面接触类 持久血路接触类 长期组织/骨/牙接触 长期循环血液接触 长期植入类医疗器械 2.遗传毒性试验涉及的医疗器械类样品 人工食道、接触眼镜、宫内节育器 创伤、愈合和保护用敷料（烫伤用敷料、硅橡胶纱布） 3.遗传毒性试验内容 遗传毒性-食品检测 Ames试验 Ames试验原理 . . . . . . . . . . . . . . . . . . .