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什么是液质联用(LC/MS) LC: 液湘色谱仪 一种能够把液体混合物中的不同组分根据在色谱柱中保留时间不同进行分离,检测及收集的仪器 MS: Mass Spectrometer 质谱仪 一种能够把分子转化生成带电离子,并在气态中根据质荷比(m/z : m质量 z分子所带电荷数 )的不同把离子进行分离并进行检测的仪器. 样品注入方式 连续注射 样品放在注射器中或静态的针内 用注射泵或电场引力, 样品流连续并恒定地流入离子源喷口 通常用于安装时调谐, 质量校正 和标准样品质谱方法的优化 流动注射分析 用手动进样器和液相泵,注入样品,由流动相带入离子源喷口 通常安装5ul的定量环 液质联用 用液相的泵,流速从 nL/min 到 mL/min 样品可能是纯品或者是混合物 流动相带着样品经过色谱柱分离后进入质谱的离子源 Turbo VTM 离子源 TurboV 离子探头 电喷雾(EI)离子源工作原理 - IonSpraytm 电喷雾 - TurboIonSpray? Turbo VTM 离子源的APCI API 3200/API 4000 仪器的接口 API3200/API 4000 的Orifice和Skimmer API4000的离子传输通道 API4000的离子通道电压的作用 四极杆的工作原理  在四极杆上加有三种电压 RF – 固定频率的交流电 (1MHz on API 2000;816 Khz on API 4000; 1.2288Mhz on API 5000) Filtering DC (FDC) – 在每组杆之间的电压差. 用于选择离子 决定分辨率. Rod Offset Voltage (ROV) – 低的直流电定义了离子轴向飞行的动力. “RF Only” 的意义: 没有FDC; 只有RF, Rod Offset 只是传输离子,没有分辨率 四极杆工作原理之RF ONLY 离子簇在离子通道的运动模式 A极和B极上的RF交流电压及ROV直流偏置电压使离子簇以螺旋运动的方式前进 四极杆的工作原理RF+DC  四极杆原理之FDC 四极杆工作原理之ROV(IE) 离子能量(IE) 影响分辨率和峰形 降低IE = 分辨率变好,灵敏度降低 提高IE = 分辨率变差,灵敏度提高 Q1离子能量= n(Q0 - RO1);n—电荷数 Q1 IE1 =Q0-RO1= 0.5-2eV Q1离子能量= n(RO2 - RO3); n—电荷数 Q3 IE3 =RO2-RO3= (1-6eV) Q1 的离子能量(IE1) 分辨率的定义 FWHH:半峰高处的峰宽 AB分辨率的定义 Unit = 0.7 (±0.1 amu FWHH) High = 0.5 (±0.1 amu FWHH) Low = ~1.1 (±0.1 amu FWHH) Open= 3-5 amu 在调节完分辨率后需要做质量校正 四极杆原理之灵敏度和分辨率 灵敏度和分辨率是相互影响,相互制约的. 分辨率差则灵敏度高 分辨率好则灵敏度低 离子检测器 (Channel Electron Multiplier) 检测器电压的调节 如果检测器电 压增加100V, 信号至少增加 20~30%.则需 要增加检测器 电压,右图情况 下:用2500v API4000的扫描方式 Q1 单级扫描模式 Q1质量扫描 (Q1 Scan): Q1 作为单级质量分析器 Q1 scan 主要用于确定母离子的m/z(质荷比) 单个宽范围质量扫描 多个小范围质量扫描 Q1 多离子信号监测 (Q1 Multiple Ion ) 对感兴趣的多个离子进行信号监测 用于单级定量 在两种 Q1 工作模式下, Q3 处于 RF-only 模式 Q3 只传输所有的Q1出来的离子到检测器 Q3 单级扫描模式 Q3质量扫描 (Q3 Scan): Q3 可用来做单级质量分析器 单个宽范围质量扫描 多个小范围质量扫描 Q3 scan 不用于确定母离子的m/z(质荷比),仅用于做Q3质量校准 Q3 多离子信号监测 (Q3 Multiple Ion ) 对感兴趣的多个离子进行信号监测 在两种 Q3 工作模式下, Q1 处于 RF-only 模式 Q1 只传输所有的离子到Q2,Q3 Q1 和 Q3 Scan Q1 和 Q3 Multiple Ion Mode MS/MS 二级质谱联用的扫描方式 MS/MS二级质谱联用的扫描方式 Product Ion产物离子扫描 分析母离子的碎片离子信息 Precursor Ion母离子扫描 分析产生特定子离子的母离子的信息 Neutral Loss