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盘点各种PCR 原位PCR： 原位聚合酶链式反应（In Still PCR,Is－PCR）是由Haase等于1990年首创。它是利用完整的细胞作为一个微小的反应体系来扩增细胞内的目的片段,在不破坏细胞的前提下,利用一些特定的检测手段来检测细胞内的扩增产物。 PCR技术常与其他技术结合起来使用， 如RT-PCR、竞争PCR、PCR、ARDRA等。 PCR 电泳得两条区带 比较两区带的丰度或引物标上标记物 检测放射性或荧光强度。 又可分为以下两种： 实时定量PCR（real time PCR, rtq-PCR）：利用萤光探针或染料半定量检测为基础进行DNA的定量分析。RCR（reverse transcription PCR，rt-PCR）：逆转录出的DNA不含内含子 RT-PCR是由三个步骤组成：1.反转录：依赖反转录酶将RNA反转录成cDNA;2.扩增：用PCR的方法扩增cDNA;3.检测：实时检测和定量扩增的产物. RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录real time PCR 与 reverse transcription PCR 相结合，能用微量的RNA来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为“定量RT-PCR（quantitative RT-PCR）”巢式PCR nest PCR ：使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。巢式PCR的好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此，巢式PCR的扩增非常特异。递减PCR touchdown PCR ：用来避免非特异性序列的扩增递减PCR开始先设定一个比较高的黏合温度，每个循环黏合温度下降1，到一个较低温度以后每个循环的黏合温度保持不变直到结束。在刚下降到特异性结合可以进行的最高温度时，可以达到最高的特异性。这样在起初的几个循环中，特异性扩增序列可以相对非特异性序列多扩增若干倍，从而减轻非特异性扩增对结果的干扰。这种方法可用于省去多次试验最佳黏合温度的工作。热启动PCR hot start PCR ：以高热活化型核酸聚合酶进行反应，以消除非特异性扩增产物7、复原条件PCR reconditioning PCR ：PCR产物稀释10倍后重新放入原浓度的引物和dNTP等循环3次，以消除产物中的异二聚体。 Shared primer PCR）： 用3条引物来扩增两种不同的DNA序列，其中一条引物与两种DNA序列都互补，这条引物与另外两条引物分别组成两对PCR引物。又称引物竞争法PCR。 9、多重PCR： 在一个反应体系中使用一对以上引物的PCR称为多重PCR。其结果是产生多个PCR产物，用于检测特定基因序列的存在或缺失。 10、不对称PCR（Asymmetric PCR）： 在PCR中加入的上、下游引物量不同，一般为100：1，在前10~15个循环中产物为双链，当低浓度引物消耗尽后，高浓度引物介导的PCR就会产生大量单链DNA。用于产生大量单链DNA可用于测序。 11、锚定PCR（Anchored PCR，APCR）： 以mRNA为模板，用oligo（dT 或与mRNA互补的寡核苷酸作引物，在cDNA3`端加上polydG作锚位，用poly dc 作锚引物，进行PCR扩增。可用于仅知一端顺序，另一端未知，或多变的DNA扩增。 12、彩色PCR（Color complement assay）直译为“着色互补性检测”，是LP-PCR的一种它用荧光染料标记引物的5’端。荧光染料JOE和FAM呈绿色荧光；TAMRA呈红色荧光；COUM呈蓝色荧光。不同荧光标记的引物同时参加反应，扩增后的目的基因会分别带有引物5’端的染料，通过电泳或离心沉淀，肉眼就可以根据不同荧光的色泽判断目标基因是否存在及扩增基因的类型。通常仅需2种不同颜色的引物，检测多种点突变时，可用更多的色彩，如多点突变的遗传病、几种可疑病毒感染、HLA位点分析都可以用彩色PCR同时检测多个位点。Labelled Primers PCR，LP-PCR）：是利用同位素、荧光素等对PCR引物5’端进行标记，据此检测目的基因的存在与否，与常规PCR相比更为直观，省去了限制性内切酶酶切及分子杂交等繁琐步骤，而且一次可以同时分析多种基因成分，因而特别适合于大量临床标本的基因诊断。目前该方法只对PCR产物进行定性鉴定。DD-PCR）： 是目前应用最多的开放的DGE技术, 它是1992 年Li