生物技术与疾病诊断幻灯片.pptVIP

常见传染病 甲类传染病：鼠疫、霍乱 乙类传染病：病毒性肝炎、细菌性和阿米巴性痢疾、伤寒、爱滋、淋病、梅毒、脊髓灰质炎、白喉、百日咳、流行性脑脊髓膜炎、猩红热、肾综合征出血热、、钩端螺旋体、布鲁杆菌病、炭疽、流行性和地方性斑疹伤寒、流行性乙型脑炎、黑热病、疟疾、登革热、肺结核、新生儿破伤风。 丙类传染病：血吸虫病、绦虫病、包虫病、麻风病、流行性感冒、流行性腮腺炎、风疹、急性出血性结膜炎，除霍乱、痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻。 海地霍乱 传统的传染病诊断技术: 一是根据临床症状判断，但这必须要求被感染者发病，根据病状进行判断，况且有些疾病临床表现非常相似，不具有典型性状，容易造成误诊！ 二是先对病原物质进行分离培养，对培养物进行生理生化检验，从而确定病原体的种类。这种方法需要花费较多时间，成本高速度慢效率低，另外，有些病毒类和衣原体类的病原体至今仍没有有效的体外培养方法，从而影响了诊断. 现代生物技术的开发应用，为医疗卫生领域提供了崭新的诊断和监测技术。人们对 疾病，特别是传染病的诊断，一个很重要的问题就是如何尽早检测感染因子的种类，因为它对疾病的针对性治疗及其预后有着极其重要的意义。 一.ELISA技术与单克隆抗体 1. ELISA技术 ELISA技术称为酶联免疫吸附检测(enzyme linked immunosorbent assay)技术。 其原理是将酶与抗体(原)交联形成酶-抗体(原)复合物。 利用抗原与抗体的特异结合以及酶将无色底物催化成有色底物，并根据在一定范围内酶量与颜色呈正相关的关系进行检测。根据底物颜色的有无以及颜色的深浅可以判断阴性或阳性反应以及反应强度，可以用于定性或定量分析。 2.常用的ELISA诊断技术 测定抗体间的间接ELISA 病原体或其他外源大分子物质进入机体后都可能刺激机体产生相应的抗体，所以可以通过检测某种病原体的相应抗体来判断是否曾经某种病原体所感染，达到诊断的目的。 测定抗原的双抗体夹心ELISA 病原体及其大分子物质进入机体后都可能成为一种抗原。所以检测机体内的抗原同样可以判断机体是否感染了相应的抗原。 3.基因工程抗原 传统抗原制备： 1. 体外培养病原体。再将病原体收集，经一系列处理后制成。 2. 对于不能进行体外培养的病原体，只能从受感染的动物或患者的组织中分离收集病原体，再经一系列处理后制成。 多克隆抗体与单克隆抗体 ELISA技术除了要制备抗原检测抗体外，有时还必须制备抗体，用于检测抗原。 抗体的制备可以将制备的抗原直接免疫动物，在被免疫的动物的血清中将会含有相应的抗体，通过一系列的纯化技术就可获得相应的抗体。但由于一个抗原往往会有多个抗体的混合物，这种混合物称之为多克隆抗体。 利用多克隆抗体进行疾病的诊断，至少有几方面的缺点： ①特异性较低 ②产品质量难于控制 ③生产过程费时，步骤多且成本较高 单克隆抗体是利用细胞融合技术，在体外大量培养融合细胞，由融合细胞产生大量的抗体。由于单克隆抗体只识别某一特定的抗原决定簇，所以它旅游特异性强、成分均一、灵敏度高、产量大和容易标准化生产等优点。因此，明显优于多克隆抗体。 二.DNA诊断技术 1978年，Kan和Dozy首先应用羊水细胞DNA限制性片段长度多态性（RFLP）做镰状细胞贫血症的产前诊断，从而开创了DNA诊断的新技术。 主要包括： DNA探针杂交技术 PCR技术 PCR-RFLP技术 PCR-ASO技术 PCR-ELISA技术 PCR-SSCP技术 PCR-DGGE技术 LCR技术 RFLP-探针技术 生物芯片技术 基因探针：将已知序列的特定基因用同位素、荧光素或酶进行标记，制备成一种诊断试剂。由于基因探针在适当条件下可与同源序列互补形成杂交体，因此，使基因探针与待检组织细胞内的基因片段发生杂交反应，通过探针上的标记观察探针是否与标本DNA结合，从而可判断标本DNA中是否有与探针一致的片段，最终对标本是否有遗传疾病或是否被某种微生物感染做出诊断。 PCR技术 聚合酶链反应（PCR）技术是一项体外扩增特异DNA 片段的技术。除了可以用于基因工程目的基因的制备外，还可用于某些疾病的诊断。 寻找传染性因子的特异DNA序列，以这段DNA序列作为靶序列，设计特异引物，对待测样品进行PCR扩增。如果检测出了相应的扩增带件事则判定为阳性反应。反之，无扩增带，则为阴