幽门螺旋杆菌感染有些检测方法.doc

幽门螺旋杆菌感染有哪些检测方法 2003-04-10 16:07:08 幽门螺旋杆菌感染的检查方法很多，主要包括细菌的直接检查、尿毒酶活性测定、免疫学检测及聚合酶链反应等方法。 1 细菌的直接检查：是指通过胃镜检查钳取胃粘膜 多为胃窦粘膜 作直接涂片、染色，组织切片染色及细菌培养来检测HP。其中胃粘膜细菌培养是诊断HP最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”，同时又能进行药敏试验，指导临床选用药物。 2 尿毒酶检查：因为HP是人胃内唯一能够产生大量尿毒酶的细菌，故可通过检测尿毒酶来诊断HP感染。尿毒酶分解胃内尿毒生成氨和二氧化碳，使尿素浓度降低、氨浓度升高。基于此原理已发展了多种检测方法：①胃活检组织尿毒酶试验；②呼吸试验；③胃液尿素或尿素氮测定；④15N-尿素试验。 3 免疫学检测：目前已有多种免疫学检测方法，通过测定血清中的HP抗体来检测HP感染，包括补体结合试验、凝集试验、被动血凝测定、免疫印迹技术和酶联合吸附测定 ELISA 等。 4 聚合酶链反应技术：正常胃粘膜很少检出HP 0～6% ，慢性胃炎患者HP的检出率很高，约50%～80%，慢性活动性胃炎患者HP检出率则更高，达90%以上。金标法快速胃幽门螺旋杆菌 H.Pylori 抗体检测 发布时间:02年08月28日 11:51 一、应用范围 ----ABI公司的SureStep H.Pylori 快速诊断检测盒直接用于体外定性检测人体血清、血浆或全血中胃幽门螺旋杆菌的特异性抗体。本检测盒用于辅助诊断有胃病症状的病例人是否感染了胃幽门螺旋杆菌，此检测盒仅供临床实验室用，仅用于体外诊断。 二、检测原理----ABI SureStep胃幽门螺旋杆菌检测盒是利用免疫层析技术定性检测人血清、血浆或全血中抗胃幽门螺旋杆菌抗体。在检测条硝酸纤维薄膜的测试区上包被有胃幽门螺旋杆菌抗原。对照区标有胃幽门螺旋杆特异性单克隆抗体。在样品端的反应垫上吸附有抗原胶体金颗粒。检测时，加入的样品首先与包被H.Pylori抗原的胶体混匀，并因毛细管作用沿膜向检测区移动。当病人样品中含有胃幽门螺旋杆菌特异性抗体时，即与T线上的抗原-抗体-抗原胶体金颗粒复合物。并显示出红线。检测区不出现颜色带，表明阴性结果。对照区总会有一条色带形成，该色带出现表明检测及操作系统工作正常。三、试剂与材料?检测盒：由包被有胃幽门螺旋杆菌抗原的硝酸纤维薄膜和吸附有抗原胶体金颗粒的反应板组成。?缓冲液 8ml ：0.05Mtris缓冲盐及0.1%叠氮钠。?一次性吸管?说明书四、保存条件----未启封的检测盒可在室温 15-30摄氏度 或者在冰箱内 2-8摄氏度 保存至其有效期。五、注意事项：1、仅使用于体外诊断。2、所有样品和对照液均作为传染物品处理。3、缓冲液及对照液内含有的叠氮钠、有潜在金属氮物的爆炸可能。当处理这些溶液时，应用大量的清水冲洗。4、勿将不同批号的试剂混用，检测盒过期请勿使用。5、在未准备进行测试时请勿打开密封袋。6、超过3天的全血样品请勿再使用。7、加热处理过及污染的血样有可能导致错误的结果。六、样品收集和制备：指尖采血：1、用酒精棉清洁采血部位。2、挤压指端使其充血，然后用消毒针头取血。3、用消毒布或棉签擦去第一点血。4、让第二点血直接滴入加样孔内，或用尖吸管吸取40ul以上的新鲜全血。往加样孔中垂直滴加2滴。全血：1、根据标准实验操作规程，由静脉抽取全血，将全血样品加入有抗凝剂（EDTA，枸橼酸及肝素，均可作为本实验抗凝剂）样品收集管中。2、全血应立即检测或保存在2-8℃下，但不得超过3天。血浆：1、根据标准实验操作规程，由静脉抽取全血，将全血样品加入有抗凝剂（EDTA，枸橼酸盐及肝素，均可作为本实验抗凝剂）样品收集管中。2、离心分离血浆。3、小心将血清吸出。血浆可直接用于检测，或在2-8℃冰箱内存放2周，也可在-20℃冰柜中冷冻至一年。血清：1、标准实验操作规程，由静脉抽取全血，将全血样品加入不含有抗凝剂的样品收集管中。2、等待全血凝固，室温静置30分钟。3、离心分离血清。4、小心将血清吸出。血清可直接用于检测，或在2-8℃冰箱内存放2周，也可在-20℃冰柜中冷冻至一年。七、检测步骤：1、测试前，将检测盒、缓冲液、患者样品及阴阳性对照液恢复至室温（20℃-30℃）。2、待一切准备就绪之后再打开检测盒的密封袋。标明患者姓名或对照。3、加样：（1）血清或血浆样品：用所提供的吸管往加样孔内垂直滴加1滴（大约20ul）血清或血浆，或者使用定量加样器滴加20ul血清或血浆。（2）全血样品：用吸管往加样孔内垂直滴加2滴（大约40ul）全血，或者使用定时加样器滴加40ul全血。（3）指尖血样品：用吸管吸取