苯丁酸钠对入胃癌细胞株课件.pptVIP

苯丁酸钠对入胃癌细胞株SGC．790 1的抗增殖和诱导分化作用的研究 研究背景： 胃癌是威胁人类生命健康最常见的恶性肿之一，化疗是其重要的治疗手段之一。恶性肿瘤诱导分化治疗，是近年来倍受关注的新策略，高效低毒的诱导分化剂是这一策略的核心，脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠是理想材料。 脱乙酰化酶抑制剂 苯丁酸钠的特点： 高效、低毒、广谱的诱导分化新药； 白血病、胶质细胞瘤、富颈癌等多种肿瘤细胞株有生长抑制和诱导分化的作用； 有效药物浓度在机体内容易达到，在对肿瘤细胞发挥抑制作用时对正常细胞影响甚微，即使较大剂量长期应用也不至于出现骨髓抑制、免疫功能低下等现象。 研究目的： 观察苯丁酸钠在体外对人胃癌细SGC．790l的生长抑制作用、诱导细胞形态变化、细胞周期改变、以及对5一FU作 于胃癌细胞株SGC．7901的抑制作用的影响，为临床胃癌的治疗提供实验依据。 研究方法： (1)对照组：正常培养细胞，不添加任何药物； (2)苯丁酸钠组：分8个亚组，浓度分别为0．25mmol／L、0．5mmol／L、l mmol／L、2mmol／L、4mmol／8mmol／L、l 6mmol／L和32mmol／L； (3)5一氟尿嘧啶(5-FU)组：分4个亚组，浓度分别6．25mg／L、12．5 mg／L、25 mg／L和50mg／L； (4)联合用药组：苯丁酸钠浓度为8mol／L，5一FU浓度分别为6．25mg／L、12．5 mg／L、25 mg／L和50mg／L。 注意： MTT法检测苯丁酸钠对人胃癌细胞株SGC．790l不同作用时间的生长抑制作用以及苯丁酸钠和5一FU联合应用对胃癌细胞株SGC、-790 l的抑制作用。 流式细胞术检测苯丁酸钠对SGC．790l胃癌细胞周期的影 MTT法检测苯丁酸钠对人胃癌细胞株SGC．790l不同作用时间的生长抑制作 材料与方法 (一)主要试剂 1、PB 2、5一氟尿嘧啶(5．FU) 3、RPMI l 640培养基 4、新生牛血清 5、二甲基亚砜(DMSO) 6、四甲基偶氮唑蓝(Methy thiazolyl tetrazolium MTT) 7、青霉素和链霉素 8、96孔板 9、胰酶 (二)主要器材 l、细胞超净工作台 2、细胞C02培养箱 3、流式细胞仪 4、酶标仪 5、倒置显微镜 6、医用低速离心机 实验步骤 l、细胞培养相关溶液配制： 2、四甲基偶氮唑蓝(MTT) 3、检测细胞周期所用溶液配制： 4、苯丁酸钠(PB)溶液的配制： 实验分组 l、对照组：只培养细胞，不加任何药物； 2、单纯PB作用组：只加入PB，终浓度分别为0．25mmol／L、O．5mmol／L、I mmol／L、2mmol／L、4mmol／L、8mmol／L、l 6mmol／L、’3 2mmol／L： 3、单纯5一FU作用组：只加入5一FU，终浓度分别为6．25mg／L、l 2．5mg／L； 25 mg／L、50mg／L； 4、PB与5一FU联合作用组：既加入PB由加入5．FU，PB终浓度为 8mmol／L，5一FU终浓度分别为6．25mg／L、12．5 mg／L、25 mg／L、50mg／L。 (三)检测方法： l、MTT比色法检测苯丁酸钠对SGC．790l细胞抑制率的影响 2、流式细胞仪(FCM)检测细胞周期 3、在倒置相差显微镜下观察苯丁酸钠作用后细胞形态的变化，并拍照。 4、MTT比色法检测苯丁酸钠对5一FU作用于人胃癌细胞株SGC．7901抑制作用的影响 实验方步骤 l、细胞培养相关溶液配制： (1)青、链霉素 (2)RPMll640培养基 (3)25 X PBS浓缩液： (4)PBS工作液： (5)0．25％胰蛋白 MTT比色法检测苯丁酸钠对 SGC．790l细胞抑制率的影响 1)分组处理：取对数生长期细胞以O．25％胰酶消化，配成单细胞悬液， 以5 X l 03个细胞／孔接种于96孔板中，每孔培养基定量为200 1．t l，置入 二氧化碳培养箱中，常规培养24小时(细胞完全贴壁)后，更换RPMll640 培养液(含血清及双抗)，定量使终体积为200 la l，分组处理。共分为9组 (每组设4个复孔)：加入苯丁酸钠，使其终浓度分别为0．25mmol／L、 0．5mmol／L、l mmol／L、2mmol／L、4mmol／L、8mmol／L、l 6mmol／L、32mmol／L和0 mmol／L(阴性对照组)。 另设空白对照组，不接种细胞，仅加入等量完全培养基(含1 O％的 新生牛血清及双抗的RPMI．1 640)。 以上各组细胞均于培养24 h(小时)、48 h、72 h、96h、l 20h五个时间 点时用MTT比色法检测细胞活性。 苯