7-土源性线虫病检测技术详解.ppt

* * 三、注意事项 于清晨受检者未排便、未运动时进行检查，时间不宜超过早上8点。 检查前不要清洗肛门，以免影响检出率。 操作过程中，要尽量暴露受检者肛门及附近皮肤皱褶，特别是肛周3点及9点钟处，以利粘着虫卵。 * 本方法主要用于检查线虫幼虫和鉴别美洲钩虫和十二指肠钩虫的幼虫。 (一) 材料 锥形离心管（长11.5cm、管口内径1.5cm）。 试管架、吸管、载玻片、盖玻片(20×20mm)、小镊子、滤纸条（宽度略大于试管直径，长度略短于试管，约9.0×1.6cm，滤纸条要用剪刀剪，防止毛边） 显微镜、温箱、解剖镜或放大镜、竹签、旧报纸、橡皮筋。 试管滤纸培养法： * 培养钩蚴材料： * 土源性线虫病检测技术 疾病预防控制中心 * 土源性线虫病的检测主要是采用病原学检查方法 病原学检查方法 粪便检查法 透明胶纸肛拭法 生理盐水直接涂片法 改良加藤厚涂片法 水洗沉淀法（钩虫卵除外） 试管滤纸培养法（钩蚴培养） （钩、蛔、鞭） （蛲） 饱和盐水浮聚法 * 改良加藤厚涂片法又称厚涂片透明法，为粪便定量或定性检查蠕虫卵的方法。 是世界卫生组织、我国推荐的，检测肠道线虫虫卵的主要方法。 基本原理：利用粪便定量或定性厚涂片，可作虫卵定量检查。经甘油和孔雀绿处理，使粪膜透明，从而使粪渣与虫卵产生鲜明的对比，便于光线透过和镜检。孔雀绿则使视野光线变得柔和，以减少眼睛的疲劳。 * 一、材料和试剂 透明液 配制方法：取蒸馏水100mL、纯甘油100mL、3％孔雀绿（或亚甲基蓝）1mL，按此比例混合均匀。也可不用孔雀绿或亚甲基蓝。 亲水性透明玻璃纸 预处理方法：取厚40μm的亲水性透明玻璃纸，剪切成大小为25mm×40mm的长方形，置于配制好的透明液中浸泡24h以上备用。 尼龙绢网 80目的尼龙绢网，裁剪成5cm×5cm大小备用。 * 一、材料和试剂 塑料定量板 规格为30mm×40mm×1mm的聚苯乙烯模板，中央孔为圆台形，其短径为3mm，长径为4mm，高1mm，容积为38.75mm3。 软性塑料刮片 规格为两头刮片型或一端刮片型，长60mm，宽6mm，厚2mm。 载玻片 规格为75mm×25.5mm，厚1.0mm～1.2mm。 其它 镊子、剪刀、记号笔、标本盒、吸水纸、光学显微镜、一次性手套等。 * 二、操作步骤 * 二、操作步骤 （一）用标本盒收集约5g粪样，在标本盒上按顺序编写检验号，并记录好相关信息，每份粪样取1～3张载玻片写上与检验号相同的编号。 （二）将80目的尼龙绢摊在粪样上，用刮棒压平后刮取粪便。 * 二、操作步骤 （三）将定量板放置玻片中央，定量孔小孔朝上，将粪样填满、抹平。约41.7mg细粪渣。 （四）垂直向上移去定量板，将亲水玻璃纸抖掉多余水分，盖在粪样上。 （五）取另一张载玻片轻压粪样，均匀展开至玻片边缘。 * 二、操作步骤 （六）待加藤片透明后镜检。粪膜置于30～36℃温箱中约半小时或室温25℃约1小时左右粪膜透明，无水雾后，即可镜检。 （七）镜检：将透明后的加藤片置于光学显微镜的载物台上，在低倍镜（100×）下进行镜检，仔细检查每一张片的每一个视野，必要时用高倍镜（400×）作进一步鉴定，及时在原始记录表上记录观察结果。 * 覆盖筛网 刮取粪液 示教 * 在定量孔上填上粪液 示教 * 盖上甘油玻璃纸 示教 * * 用一张载玻片压片 示教 * * 加藤片透明 示教 * 约半小时透明后可镜检 示教 * 二、操作步骤 （八）虫卵计数 1. 每张涂片发现的鞭虫卵、钩虫卵全片计数。 2. 每张涂片发现的蛔虫卵、肝吸虫卵原则上全片计数，但如果蛔虫、肝吸虫感染度特别高，即每个视野蛔虫卵（肝吸虫卵）多于10个，用定视野抽查法推算全片蛔虫卵、肝吸虫卵数。 * 二、操作步骤 （八）虫卵计数 按下图分布固定抽查10个视野，并算出抽查的10个视野蛔虫卵（肝吸虫卵）的平均数乘以全片的视野数，得到全片虫卵数近似值全片粪膜蛔虫卵（肝吸虫卵）总数。 * 二、操作步骤 （八）虫卵计数 计算3张加藤片的虫卵数分别为A、B、C，每克粪便虫卵数(EPG)为：(A+B+C)?×8；如只有1张加藤片则应乘以24。（1÷41.7≈24） * 三、注意事项 亲水性玻璃纸在使用前需全部浸入透明液中，浸泡24小时以上。 刮取粪渣填入定量板必须填满全孔并抹平，压制涂片时尽量使粪便均匀展开至边缘，并避免粪渣溢出。 在定量应用中，为提高检出率，有时要求每一样本作3张加藤片。 * 三、注意事项 粪膜要均匀铺开，不宜过厚。 透明时间要适度。如透明时间短，虫卵难以发现；时间过长则虫卵变形，不易辨