(饲料科学课件）2011-12-07植物性饲料中转基因成分定性PCR检测.ppt

实验二 饲料中转基因成分定性PCR检测 转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术。 转基因技术概念 “遗传工程”、“基因工程”、“遗传转化”均为转基因的同义词。 1983年：第一例转基因植物问世 1986年：转基因作物进入田间试验 1994年：第一例转基因延熟番茄批准商业化种植 2010年：全球共批准24种转基因作物可以商业化种植或食用，其中仅4种作物大规模种植 转基因作物产业化概况 2010年，转基因大豆占全部转基因作物种植面积50%，转基因玉米31%、转基因棉花14%、转基因油菜5% 主要转基因作物—大豆、玉米、棉花、油菜 2010年，29个国家种植1.48亿公顷转基因作物（ISAAA） 排名 国家 面积（万公顷） 转基因作物 1 美 国 6680 玉米, 大豆, 棉花, 油菜, 甜菜, 紫苜蓿, 番木瓜,南瓜 2 巴 西 2540 大豆, 玉米, 棉花 3 阿根廷 2290 大豆, 玉米, 棉花 4 印 度 940 棉花 5 加拿大 880 油菜, 玉米, 大豆,甜菜 6 中 国 350 棉花, 番木瓜, 杨树, 番茄, 甜椒 7 巴拉圭 260 大豆 8 巴基斯坦 240 棉花 9 南 非 220 玉米,大豆, 棉花 10 乌拉圭 110 大豆, 玉米 大豆及其制品 玉米及其制品 油菜籽油 棉籽油 番木瓜及相关产品 我国市场上现有的转基因产品 转基因作物 靶标生物 非靶标生物 生物多样性 食 链 物 系 态 生 GMO对生态系统的影响 花粉 Bt玉米 马利筋 斑蝶事件 斑蝶幼虫死亡44％(室内) 1999年5月，康奈尔大学的一个研究组在《Nature》杂志上发表文章，声称用带有转基因抗虫玉米花粉的马利筋(一种杂草)叶片饲喂美国大斑蝶，导致44％的幼虫死亡，由此引发GMO安全性的争论。 饲料中转基因成分的潜在危害 毒性 过敏性 营养成分及抗营养因子 农杆菌介导转化技术 DNA提取原理 步骤 作用 液氮研磨 细胞破碎 提取液 离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来 β-巯基乙醇 一种还原剂，可以用于在DNA提取过程中防止细胞内物质发生褐变对实验结果产生影响 Tris饱和酚、氯仿 苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质 异丙醇 可以降低表面张力，减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡；有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定 基因组DNA提取过程 PCR原理 PCR原理 PCR原理 PCR原理（动态） PCR的反应体系 试剂名称 储备液浓度 25μl反应体系加样量（μL） 10×PCR缓冲液 — 2.5 氯化镁 25mmol/L 2.5 dNTP 25mmol/L 2.5 Taq酶 5U/μL 0.2 正义引物 10pmol/μL 0.5 反义引物 10pmol/μL 0.5 DNA模板 50-200ng 1.0 无酶水 — 15.3 PCR反应扩增程序 基因 预变性 扩增 循环数 延伸 1 94℃，5min 94℃，1min 60℃，1min 35 72℃，10min 琼脂糖凝胶电泳原理 琼脂糖凝胶电泳过程 本实验样品 转基因玉米 抗草甘磷基因 本实验要求： 提取转基因玉米基因组 PCR扩增靶基因 琼脂糖凝胶电泳观察扩增产物 作业：理解各实验过程的原理并分析实验方法的关键点。