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12例聚集性MRSA感染病例的临床分析 【摘要】目的： 探讨MRSA感染来源、感染途径，为防控多重耐药菌院内传播制定有效措施。方法 采用实时荧光定量PCR方法对菌株的16srRNA、femA、mecA 进行鉴定。用结合针对7个管家基因的MLST分型和Spa分型进行菌株同源性分析。 结果：通过对我院肿瘤内科收治的12例聚集性MRSA感染病例的相关因素分析，12例患者，8例为晚期恶性肿瘤患者，3例为复发性多软骨炎，1例为重症病毒性脑炎患者，均因气道狭窄来我院治疗，感染部位为肺部，入院前已在全国多家大医院先后数次住院治疗，其中5例为接受支气管镜检查治疗3-5次后发生院内感染MRSA，但入院时未作定植筛查。在流调中取样检出一位护士携带金葡，我们将护士携带的金葡与患者感染的MRSA总计13株做同型分析，结果我院护士所带金葡菌为t1245；12例患者感染MRSA均为t030,为亚洲医院主要流行株。结论：患者感染途径不支持医护间传播；患者感染的MRSA虽基因型相同但明显来源不同，故基因分型结果不能作为此次感染的同源依据；此期间发生的聚集性MRSA流行，提示应对感染MRSA高危患者行主动筛查，以尽早实施接触隔离措施。 【关键词】MASA 医院感染 聚集性发病 基因分型 近年来，多重耐药菌感染问题日益严重，已成为医院感染的重要病原菌，对多重耐药菌的院内感染预防与控制工作，是院感防控工作的重点内容。MRSA是卫生部要求监控的多重耐药菌之一，我院2012年2月19日至3月29日在同一病区发生了12例聚集性MRSA感染事件。为此院感办进行了广泛细致的流行病学调查，同时用分子生物学方法对爆发期间检出的MRSA进行同源性分析，。 材料与方法 材料 1.1病历来源：12例患者为我院肿瘤内科于2012年2月19日至3月29日因气管狭窄而收入院行支气管镜检查治疗的病人，感染部位均为肺部感染，其中男7例，女5例；8例为晚期恶性肿瘤患者，3例为复发性多软骨炎，1例为重症病毒性脑炎患者，均因气道狭窄来院治疗，最大年龄为66岁，最小年龄为36岁。 1.2 主要仪器与设备 全自动细菌鉴定仪（Simen MicroScan WalkAway 40，德国），荧光定量PCR仪（罗氏Light cycler480，美国），荧光定量PCR所用引物及反应所需Taqman探针、SYRB荧光染料及反应体系所需试剂由北京梓熙生物工程公司合成，扩增后的产物由该公司进行测序。 2 方法 2.1 菌株鉴定及药敏试验 菌株经全自动细菌鉴定仪鉴定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），经触酶和凝固酶试验确认。药敏试验参照CLSI指南（2012年）标准。实时荧光定量PCR检测16SrRNA基因中葡萄球菌特异的靶位点、金黄色葡萄球菌特异性靶基因femA以及耐药决定基因mecA。 2.2 DNA模板制备 采用裂解煮沸法制备模板。挑纯培养菌落6-8个置于1.5ml离心管内，38C水浴30min，95C煮沸10min。15000rpm/min离心20s，吸取上清液作为模板液。 2.3 实时荧光定量PCR 16S rRNA、femA、mecA、spa及MLST基因分型所用引物参照文献进行设计[1-3]，其中MLST基因分型选用7个管家基因设计引物。荧光染料为SYBR GreenI，反应体系20ul。PCR反应条件为： 2.4分型结果分析 用于MLST和spa分型的PCR产物送北京梓熙生物科技有限公司纯化测序。 2.4.1 MLST分型中7个管家基因的测序结果提交MLST分型网站（）确定每株MRSA的等位基因谱，进而确定型别，结果以序列型（sequence type,ST）表示。再用eBURST软件对菌株序列型所属的克隆复合体进行分析。 2.4.2 Spa基因序列按官方网站Ridom SpaServer (http://www.ridom.de/spaserver)的要求编辑后对结果进行比对分析并确定型别，结果以t加3位或4位阿拉伯数字表示。 2.4.3 综合上述MLST分型与Spa的分型结果，每株菌株的分子型别按国际惯例使用“MLST型别-Spa型别”方法表示。 结 果 MRSA的鉴定 同时满足触酶阳性、凝固酶试验阳性，荧光定量PCR16S rRNA基因、femA基因、mecA 基因全部阳性的菌株判定为MRSA。 患者MRSA检出时间及空间分布 在34天时间内共有12例患者检出MRSA，其中5例为本次院内感染。时间分布如图1，空间分布如图2。 图1 MRSA检出时间分布及院内感染MRSA时间分布 图2 病区床位分布图 3. 12例MRSA感染病倒相关危险因素分析：具体情况见表1 12例患者全部患有严重的原发病，并因原发病而在全国多家大医院先后数次住院行手术治疗、激素治疗