waters孔雀石绿SPE方法.docVIP

水产品中孔雀石绿的提取方法 溶剂配制： 1.溶液A：0.1M 柠檬酸单水合物：10.5g柠檬酸单水合物溶解在500ml水中。 2.溶液B：0.2M 磷酸氢二钠二水合物：14.2g磷酸氢二钠二水合物溶解在500ml水中。 3.Mcllvaines buffer pH 2.6 : 445.5ml A 与54.5ml B混匀。 4.Mcllvaines buffer pH 2.6 : 甲醇（50：50）：250ml Mcllvaines buffer pH 2.6 与250ml 甲醇混匀。 5.洗脱溶液：50%乙酸乙酯：45% 甲醇：5%氨水：5ml氨水加入50ml的乙酸乙酯，再加入45ml的甲醇，混匀。 6.TMPD 溶液（1mg/ml）：50mg TMPD溶于50ml甲醇。 样品前处理步骤： 1.精称1.0g±0.1g水产品，平行两份，加入30ml旋口塑料离心管中。 2.加入TMPD溶液（1mg/ml）50ul。 3.加入内标（D5-MG/D5-LMG,100ng/ml）20ul,放置10min。 4.加入Mcllvaines buffer pH 2.6 : 甲醇（50：50）10ml,匀浆45秒。 5.离心2400rmp，20min,提取上清液，移入15ml试管中，为上样液。 6.使用 Waters Oasis MCX 3CC/60MG 小柱净化，具体步骤见下： 洗脱 5ml 50%乙酸乙酯：45% 甲醇：5%氨水 清洗 4 3ml 正己烷，真空抽干5min 清洗 3 2ml 50%甲醇 清洗 2 2.5ml 水，两次 清洗 1 2ml 0.1N HCL 上样 约9ml） 平衡 2ml水，2mlMcllvaines buffer pH 2.6 活化 2ml甲醇 65℃，氮气流下吹干，用100ul流动相定容