第七章_细胞融合及应用分解.ppt

第七章 细胞融合与应用 杂种细胞筛选方法： 1．遗传互补筛选法 2．抗性互补筛选 3．生长特性筛选法 4．物理特性筛选法 5．其它方法 第四节 细胞融合技术应用举例 动物细胞融合—单克隆抗体生产 利用原生质体融合和培养技术培育新植物 微生物原生质体融合构成新菌株 应用2：利用原生质体融合和培养技术培育新植物 1．植物原生质体培养的意义： ① 融合产生体细胞杂种 ② 分离或引入各种细胞器 ③ 导入外源基因 ④ 诱发突变体 ⑤ 研究细胞信息传递、能量转换、物质运输等 ⑥ 研究细胞壁的合成机制 ⑦ 研究膜的功能与细胞膜的相互作用 ⑧ 研究核质关系 ⑨ 研究疾病与抗性机理 2 原生质体制备过程 原生质体的来源: * 植物叶片 取材容易 比较容易用酶解法分离 * 植物根尖组织 可由各种植物的种子萌发后取得 * 植物花粉 产生单倍体原生质体 * 愈伤组织、悬浮培养的细胞 细胞壁容易解离 植物原生质体纯化的方法： 目的：去除破碎的原生质体、末去壁的细胞、细胞器及其他碎片等杂质。 1 沉降法 2 漂浮法 3 界面法 （1）沉降法 原理： 利用比重原理，在具有一定渗透压的溶液中，先进行过滤（44-169μm的筛网），然后低速离心（900-4500r/min，2min ，使纯净完整的原生质体沉积于试管底部 . 优缺点： 比较简单 但不易除尽一些完整的细胞，或引起原生质的破碎 （2）漂浮法 原理： 采用比原生质体比重大的高渗溶液，使原生质体漂浮在溶液表面。 优缺点： 可以得到较为纯净、完整的原生质体， 但完好的原生质体数量较少 （3）界面法 原理： 采用两种比重不同的溶液，使原生质体处于两液相的界面之中。 优缺点： 可以收到数量较大的纯净原生质体，同时避免收集过程中原生质体因相互挤压而破碎。 3 原生质体培养 ①液体培养 分：液体浅层培养 液体悬滴培养 ② 固体平板法 ③ 双层培养法 4 利用原生质体融合培育新植株 应用3：微生物原生质体融合构成新菌株 微生物原生质体的获得、纯化、培养等类似于植物原生质体。微生物原生质体融合是一种方法简单用途较广的技术，在育种中将会有更多的实际应用。（略） 第五节 细胞融合技术的进展与展望 不对称融合 胞质杂种 展望 一、不对称融合 涵义：指用射线处理融合亲本之一的原生质体，杀死细胞核，再同另一个亲本原生质体融合，其融合体称不对称融合。 二、胞质杂种 涵义：指去掉核后的细胞质与另一个完整的细胞融合形成的杂种细胞。 三、展望 细胞融合在细胞遗传学、细胞核质关系、单克隆抗体及远缘杂交育种等方面具有重要价值。 只针对某一抗原决定簇的抗体分子称为单克隆抗体。 T淋巴细胞：即胸腺依赖淋巴细胞（thymus dependent lymphocyte）。亦可简称T细胞。来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。目前认为，在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。 人类免疫系统的介绍 外分泌淋巴系统：呼吸道和生殖泌尿系统 内分泌淋巴系统：胸腺、骨髓、脾脏、扁桃体、淋巴结等 B淋巴细胞：来源于骨髓的多能干细胞。在禽类是在法氏囊内发育生成，故又称囊依赖淋巴细胞（bursa dependent lymphocyte）/骨髓依赖性淋巴细胞简称B细胞，是由骨髓中的造血干细胞分化发育而来。与T淋巴细胞相比，它的体积略大。这种淋巴细胞受抗原刺激后，会增殖分化出大量浆细胞。浆细胞可合成和分泌抗体并在血液中循环。成熟的B细胞经外周血迁出，进入脾脏、淋巴结，主要分布于脾小结、脾索及淋巴小结、淋巴索及消化道粘膜下的淋巴小结中，受抗原刺激后，分化增殖为浆细胞，合成抗体，发挥体液免疫的功能。B细胞在骨髓和集合淋巴结中的数量较T细胞多，在血液和淋巴结中的数量比T细胞少，在胸导管中则更少，仅少数参加再循环。B细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原及表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。 　　B1细胞为T细胞非依赖性细胞。B2为T细胞依赖性细胞。B细胞在体内存活的时间较短，仅数天至数周，但其记忆细胞在体内可长期存在。 B细胞淋巴瘤是一种最常见的淋巴细胞白血病，有关这种疾病的研究不断涌现。 单克隆抗体技术的核心是用骨髓瘤