岷江百合中黄瓜花叶病毒诱导的LrPR10的克隆及表达试卷.doc

园 艺 学 报 2014，41（6）：1218–1226 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2013–11–20；修回日期：2014–05–08 基金项目：国家高技术研究发展计划（‘863’）项目（2011AA1008） * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：zhangyanlong@） 岷江百合中黄瓜花叶病毒诱导的LrPR10的克隆 及表达分析 张响玲，张延龙*，牛立新，孙道阳，梁振旭 （西北农林科技大学林学院，陕西杨凌 712100） 摘 要：为了研究黄瓜花叶病毒（CMV）诱导的岷江百合（Lilium regale）病程相关蛋白PR10基因 在抗病毒防御反应中的作用，对岷江百合叶片接种CMV，采用RACE技术获得岷江百合LrPR10的全长 cDNA序列，并对其进行生物信息学分析；利用实时荧光定量PCR对LrPR10在各器官特异性以及CMV 和水杨酸（SA）处理后的表达模式进行了测定分析。结果表明：LrPR10全长756 bp，可编码由157个氨 基酸组成的蛋白质，该蛋白具有病程相关蛋白典型的Bet_v1_like保守结构域；LrPR10在岷江百合鳞茎中 相对表达量最高，在嫩叶中最低；该基因可以被CMV和SA诱导上调表达，岷江百合、卷丹（L. lancifolium） 和宜昌百合（L. leucanthum）在CMV接种处理后LrPR10的相对表达量分别在4 d、4 d和1 d达到最大值， 分别为处理前的58倍、27倍和292倍，在SA处理后LrPR10的相对表达量都在8 h达到最大值，分别为 处理前的34倍、8倍和38倍。以上结果表明LrPR10在岷江百合抗黄瓜花叶病毒防御反应过程中发挥作 用。 关键词：岷江百合；黄瓜花叶病毒；LrPR10；RACE；表达分析 中图分类号：S 682.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1218-09 Cloning and Expression Analysis of LrPR10 Gene from Lilium regale Induced by Cucumber mosaic virus ZHANG Xiang-ling，ZHANG Yan-long*，NIU Li-xin，SUN Dao-yang，and LIANG Zhen-xu （College of Forestry，Northwest A F University，Yangling，Shaanxi 712100，China） Abstract：This study aimed to clone PR10 gene which was up-regulated in the leaves of Lilium regale infected by Cucumber mosaic virus（CMV）and examine the role of PR10 gene in defense response against CMV. The full length of LrPR10 was amplified by RACE and analyzed with bioinformatics tools. Real-time PCR was performed to check the transcript levels of LrPR10 in different organs of L. regale， CMV-inoculated and salicylic acid（SA）–treated leaves. The results showed that the length of complete cDNA of LrPR10 was 756 bp，which encoded 157 amino acids consisting of a Bet_v1_like conserved domain of pathogenesis-related proteins. The transcript level of LrPR10 was the highest in bulbs，whereas the lowest in tender leaves. LrP