第七章细胞介导的免疫应答分解.ppt

第七章 细胞介导的免疫应答 第一节 免疫应答的基本概念 一、免疫应答的非特异性和特异性 二、主动免疫、被动免疫和过继免疫 三、无应答 第二节 免疫应答的基本过程 一、抗原提呈细胞 二、T细胞活化 三、外源性Ag免疫应答 四、内源性Ag免疫应答 一、细胞凋亡 二、细胞凋亡的检测 三、细胞凋亡与免疫 发生严重炎症反应 不发生炎症反应 细胞器破裂，染色质不均一 细胞器完整，染色质均一凝集 细胞肿胀溶解 细胞膜内陷分割形成凋亡小体 DNA无序降解 DNA呈梯度降解 无基因调控 有新的基因转录及蛋白质合成 不需能量 需要能量 非生理因素造成的损伤　 诱因为生理因素 细胞坏死 细胞凋亡 细胞凋亡与坏死的主要区别 应用形态学、生物化学、分子生物学、免疫学方法都可将凋亡细胞与活细胞及坏死细胞区分开来，部分方法可对凋亡细胞进行定量分析，常用的方法包括: 细胞凋亡的检测 形态学检测方法 免疫学检测方法 生物化学检测方法 1、形态学检测方法 （1）利用光学显微镜直接观察细胞大小、形态、细胞器、凋亡小体及核染色质结构等。 （2）染料拒染试验 台盼蓝：可使死细胞着色，活细胞不着色。 荧光染料：碘化丙啶(PI)可使死细胞染色，在紫外光下发红荧光，而活细胞和凋亡细胞不被染色。二乙基荧光素和双苯胼咪唑(Ho)可被活细胞及凋亡细胞吸收，水解后二乙基荧光素在紫外光下发绿荧光，Ho发蓝荧光，经流式细胞仪分析，可将PI和Ho染色分开，从而可以区分凋亡细胞和坏死细胞。 2、生物化学检测方法 细胞凋亡时染色质浓缩，DNA在核小体之间的连接处被核酸内切酶切断，形成相差180~200bp长度左右的DNA梯度片段，经琼脂糖电泳，再用溴化乙啶染色后，在紫外光下可以观察到典型DNA梯度片段。 也可先以3H-TdR在细胞培养时掺入标记DNA，再将细胞处理，用离心法将大分子DNA和小分子DNA分开，分别测定其放射活性，计算凋亡细胞百分率。 3、免疫学检测方法 有时凋亡细胞数较少，用DNA梯度分析法难以检测，必须用更灵敏的方法。 酶联免疫分析法(ELISA)：是将抗组蛋白抗体吸附于酶标测定板，再加入待测细胞裂解物的上清液，使核小体与抗组蛋白抗体结合，洗去未结合的各种分子，最后加入酶交联标记的抗DNA抗体——过氧化物酶，此抗体与核小体上DNA结合，再加入过氧化物酶的底物如二氨基联苯，过氧化物酶可催化其脱氢氧化而显棕色，在酶标分析仪上测定OD405值，与对照相比可定量分析凋亡细胞。 ELISA的优点： (1)灵敏度高、需要的细胞数少、最低可检测到50个细胞凋亡，且可同时对多份样品进行检测。 (2)抗体无种属特异性，可测定不同种属的细胞凋亡。 (3)测定方法简便，不需要预先标记细胞。 细胞凋亡的检测方法还有许多，基本原理主要有以下几方面： （1）形态学改变； （2）细胞通透性改变； （3）DNA梯度降解分析； （4）细胞凋亡相关的膜表面分子的检测。 免疫系统中的细胞和分子具有高度多样性，以应付自然界千差万别的抗原物质，发挥免疫效应。这些免疫细胞和分子能精确的识别和区分外来物和自身物质，从而清除外来抗原物，维持自身的稳定。 两条途径均可激活JNK蛋白激酶(JNK-1)。TCR途径激活磷脂酶C(PLC)导致IP3增高，使内质网Ca+2释放导致胞质钙增高，进一步激活钙调磷酸酶，它与JNK通过DNA结合蛋白启动IL-2基因的转录，分泌IL-2作为T细胞生长因子，又可与T细胞自身IL-2受体结合，形成正反馈增殖放大，从而活化T细胞。 外源性Ag是通过MHC-Ⅱ分子提呈的。 APC中内质网上新合成的MHC-Ⅱ分子，在无抗原肽时，是与内质网上的恒定链分子结合的。 1、 MHC-Ⅱ分子的表达 外源性Ag经过APC的内吞作用，形成内粒体进入胞质。内粒体中含多种水解酶，可将抗原水解成含12-20氨基酸的肽段。 随后，恒定肽被降解，囊泡继续向胞质外移动，最终与细胞外膜融合，从而使结合有抗原肽的MHC-Ⅱ分子表达于APC表面。 MHC-Ⅱ与恒定链的复合物随着内质网膜移动，形成囊泡，并与内粒体融合，然后，MHC分子上的恒定链被抗原肽取代，形成MHC-Ⅱ与抗原肽的复合物。 （1）MHC-抗原肽-TCR复合物：APC表面MHC-Ⅱ与抗原肽结合形成复合表位，共同被Th识别，T细胞表面的TCR及其共受体CD4以及膜内信号传递分子CD3在Th细胞膜上形成复合物，APC上MHC-肽复合物与TCR结合，同时被CD4识别结合，形成MHC-抗原肽-TCR复合物，称为第一信号，从而将细胞活化信号传入Th细胞