生物技术的免疫原性和免疫毒性剖析.ppt

生物技术药物的免疫毒性和免疫原性研究 Kaiyong LIU  华南农业大学 生物技术药物 生物技术药物 包括体内诊断、治疗与预防用途； 来源于细菌、酵母、昆虫、植物和哺乳动物细胞 蛋白质、多肽及其衍生物、核酸 如细胞因子、生长因子、融合蛋白、酶、激素、单抗、载体等 特殊性 结构、生产工艺、保存条件、同源性、作用靶点明确等固有的特点 免疫毒性/免疫原性 免疫毒性 是指受试品引起免疫抑制或增强、过敏反应或自身免疫反应，可能与药理活性相关（如抗排斥药物）或不相关（如部分抗肿瘤药物）。 免疫原性 指药物刺激机体形成特异性抗体或致敏淋巴细胞的性质。 研究意义 意义重大：如 免疫抑制，感染↑，肿瘤↑ 免疫增强，放大自身免疫反应或过敏反应。 免疫原性，是药物本身具有的性质，有免疫原性不一定导致毒性，但可以影响对药物毒性、毒代或药效的客观评价。 但在规范及指导原则方面，缺乏共识，实验方法也不统一 免疫毒性研究内容一 常规的免疫毒性指标包括： 白细胞总数及其分类计数 球蛋白和白/球比值 补体水平 淋巴器官/组织的大体解剖 胸腺和脾脏的器官重量 免疫病理：胸腺、脾脏、引流淋巴组织 免疫毒性研究内容二 额外的免疫毒性试验（additional studies），如 (1) 常规免疫毒性检测结果提示免疫毒性，感染↑ (2) 受试品的结构，与已知免疫调节剂相似 (3) 药代动力学结果:原型药或代谢产物在免疫组织 蓄积 (4) 适应症:如用于抗HIV药物 (5) 药理作用：常对免疫系统有影响 常规的免疫毒性检测结果 —引流淋巴组织检查 常规的免疫毒性检测 —免疫抑制/增强 全血细胞变化、白细胞变化或淋巴细胞变化等。 免疫器官重量改变或组织学检查显示相关器官或组织细胞密度变化 血清免疫球蛋白变化 用药组感染发生率升高 用药组肿瘤发生率增多(除遗传毒性、激素效应或肝酶诱导外) 额外的免疫毒性试验内容 免疫功能检测 如T细胞依赖的抗体反应、NK细胞活性、CTL活性、细胞因子表达、巨噬细胞/中性粒细胞功能、皮肤超敏反应、宿主抵抗力研究） 免疫表型检测 依据免疫学理论和具体靶分子种类 额外的免疫毒性试验方案 增设卫星组、增加免疫学指标或改变给药方案等。 发育免疫毒性：在成年动物中发现免疫抑制作用后，需要评价发育免疫毒性作用，如观察母代暴露于药物后仔代的淋巴系统、血液系统、细胞因子等，两种以上功能检测等。不仅是免疫抑制！ 常规阶梯或分层或标准试验组合不一定合理，需个体化 额外的免疫毒性试验方法 免疫功能检测 额外的免疫毒性试验方法 免疫功能检测 额外的免疫毒性试验方法 免疫表型检测 常用流式细胞仪检测，检测表达水平和比例 免疫功能检测 —分泌IFNγ细胞 免疫细胞表型检测 —CD22阳性比例 免疫细胞表型检测 —CD4/CD8比例 免疫毒性试验结果分析 统计学意义与生物学意义（尤其单一指标） 变化程度 与剂量/暴露关系 与拟用临床剂量的关系 疗程关系 涉及动物种属数量和受影响的终点 可能继发于其他因素 (e.g., stress,） 可能的细胞靶点和（或）作用机制 引起这些变化的剂量与产生其他毒性的剂量关系 可逆性 免疫毒性靶器官的分析线索 靶分子在免疫器官或组织的分布 受试品或其代谢产物的分布 相关指标的变化 —常规免疫指标、细胞因子变化等。 免疫毒性机制推测 受体或药靶直接引起的毒性反应（on-target) —如干扰素引起骨髓抑制 受体或药靶介导的间接毒性反应 —如rhIL-12能诱导干扰素的分泌 非特异机制 —如rhTNK-tPA引起肝细胞剂量依赖性的脂肪变性。 免疫原性研究内容 免疫原性(immunogenicity) 指诱导宿主产生免疫应答的能力，具有这种能力的物质称为免疫原(immunogen）。产生特异性抗体或致敏淋巴细胞能力。 影响因素 分子大小，10 000，5 000～10 000，1000 ～5000 分子结构，蛋白质＞多糖＞核酸＞类脂 宿主因素、免疫方式 免疫原性研究意义 免疫原性影响重复给药毒性试验结果的分析：中和药物活性、改变药物的清除、半衰期和组织分布 （neutralize drug activity and alter drug clearance, plasma half-l