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系统性红斑狼疮患儿外周血淋巴细胞亚群变化 　　[摘要] 目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患儿外周血淋巴细胞亚群变化特征。 方法 选择24例SLE病儿和20例健康儿童为研究对象，应用流式细胞术（FCM）检测外周血的淋巴细胞亚群，对比分析两组检测结果。 结果 SLE患儿外周血CD4+CD25+T细胞、自然杀伤（NK）细胞百分率较对照组明显降低（t=2.480，3.773；P0.05）， CD8+T细胞、活化T细胞和B 细胞百分率明显升高（t=3.470，4.779，2.480；P0.05或P0.01）。 结论 SLE患儿外周血淋巴细胞亚群紊乱，调节性T细胞和NK细胞减少、B细胞增多和T细胞活化增强，在SLE发病机制中可能起重要作用。 　　[关键词]系统性红斑狼疮；儿童；淋巴细胞亚群 　　[中图分类号] R593.241 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）23-57-03 　　系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematesus，SLE）是儿童较为常见的自身免疫病之一，亚洲儿童SLE的发病率为（6.3～19.3）/10万，成人SLE患者中约15%～20%在儿童期起病[1]，儿童SLE较成人临床表现更为严重，有潜在的致命性，预后更严重。SLE为多系统、多器官受累的全身性自身免疫病，以多克隆B细胞的活化和产生多种自身抗体为特征。其发病与多因素有关，包括个体易感基因、环境因素及两者之间的相互作用等造成患儿免疫系统存在不同程度的异常和失衡[2]，其中淋巴细胞亚群比例失调或功能异常、细胞因子及其受体的基因结构、转录及功能缺陷、淋巴细胞凋亡失常等因素可能与其发病有关[3-4]。本研究通过测定SLE患儿及健康患儿外周血淋巴细胞亚群的改变，探讨淋巴细胞亚群变化与儿童SLE发病的关系。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　1.1.1 SLE组 选择2010年1月～2013年6月在青岛大学医学院附属医院儿内科住院诊治的SLE患儿共24例为研究对象，均符合1997年美国风湿病学会（ARA）修订后的SLE诊断标准，男3例，女21例，男∶女=1∶7；起病年龄平均（10.6±1.9）岁。 　　1.1.2 正常对照组 选取20例健康体检儿童作为对照组，其中女17例，男3例；平均年龄（9.5±1.9）岁。与SLE组在年龄、性别方面比较差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2 检测指标与方法 　　1.2.1 标本采集 两组儿童均清晨空腹取外周静脉血2mL，加入无菌肝素管（肝素20U/mL），充分抗凝后送检。 　　1.2.2 仪器与试剂 （1）主要试剂：FITC/PE标记单克隆抗体：CD3-FITC/CDl6+56-PE、CD4-FITC/CD8-PE、CD4-FITC/CD25-PE、CD19-PE、CD3-FITC/HLADR-PE；全血溶血试剂：A甲酸 B碳酸钠等 C多聚甲醛；鞘液；清洗液；荧光微球。均由美国贝克曼库尔特公司提供。（2）仪器：流式细胞仪，美国贝克曼库尔特公司生产。仪器型号： Epics-XL。 　　1.2.3 检测指标与方法 取100μL待测血清样品分别加入CD3-FITC/CDl6+56-PE、CD4-FITC/CD8-PE、CD19-PE、CD4-FITC/CD25-PE、CD3-FITC/HLADR-PE及FITC/ 　　PE标记单克隆抗体各20μL，混匀，放置于室温下避光孵育15～20min后加入甲酸溶血液600μL，碳酸钠缓冲液250μL，混匀，溶血10min， PBS洗涤细胞，1500r/min离心5min，弃掉上清液，用1%的多聚甲醛0.5mL固定细胞，应用美国Beckman-Coulter公司Epics-XL型流式细胞仪测定CD3+（总T）、CD3+CD4+（辅助性T）、CD3+CD8+（细胞毒性T）、CD3+HLADR+ （活化T）及CD3-CD56+（NK细胞）、CD4+CD25+（调节性T）和CD19+（B细胞）百分率。 　　1.3 统计学处理 　　采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。实验数据呈正态分布，以（）表示。采用t检验，以α=0.05为检验水准，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　SLE患儿及对照组外周血淋巴细胞亚群测定结果见表1。经统计学分析发现，SLE患儿疾病活动期外周血中CD4+CD25+ T细胞和自然杀伤（NK）细胞百分率明显低于对照组，差异有统计学意义（t=2.480，3.773；P0.05）。 　　3 讨论 　　系统性红斑狼疮患儿存在免疫系统紊乱，T、B淋巴细胞的免疫耐受丧失导致针对自身细胞抗原的抗体的持续性产生，并形成免疫复合物，激活补体系统，继而引起全身各组