茯苓的化学成分研究.docVIP

茯苓的化学成分研究 　　[摘要] 对中药茯苓的化学成分进行了研究。利用正相和反相硅胶柱，Sephadex LH-20和制备型HPLC等色谱技术从中分离得到13个化合物，分别鉴定为土莫酸（1）、去氢土莫酸（2）、3β，5α-二羟基麦角甾-7，22-二烯-6-酮（3）、3β，5α，9α-三羟基麦角甾-7，22-二烯-6-酮（4）、麦角甾-7，22-二烯-3-酮（5）、6，9-环氧麦角甾-7，22-二烯-3β-醇（6）、麦角甾-4，22-二烯-3-酮（7）、麦角甾-7，22-二烯-3β，5α，6β-三醇（8）、麦角甾-7，22-二烯-5，6-环氧-3-醇（9）、β-谷甾醇（10）、核糖醇（11）、甘露醇（12）、齐墩果酸乙酸酯（13）。并运用质谱、核磁等波谱技术对分离得到的化合物进行了结构鉴定。化合物3～13为首次从该种中药中分离得到。 　　[关键词] 茯苓；化学成分；甾醇 　　茯苓为担子菌门Basidiomycota，伞菌纲Agaricomycetes，多孔菌科Polyporaceae真菌茯苓Poria cocos（Schw.） Wolf的干燥菌核，首载于《神农本草经》，列为上品[1]，有利水消肿，渗湿，健脾和宁心之功效，多用于治疗小便不利，水肿胀满，痰饮咳逆，脾胃气虚，食少便溏，体倦乏力以及心神不安，惊悸，失眠等[2]。 　　茯苓资源丰富，药理作用显著，因此，20世纪70年代以来，中外学者对它的化学成分进行了广泛的研究。本文从茯苓中分离了13个化合物，均为首次从茯苓中分离得到。 　　1 材料 　　Boetius 显微熔点仪（温度未较正）；MERCURY-300，400，500，600型核磁共振谱仪测定；ESI用Agilent 1100LC/MSD Trap SL 型质谱仪；柱色谱以及薄层色谱用硅胶为青岛海洋化工厂生产；Sephadex LH-20为Pharmacia 产品；反相填料用ODS（YMC公司产品）； Luntech制备型HPLC以及YMC-Pack ODS-A反相制备柱（20 mm×250 mm，5 μm）。所用试剂均为分析纯，由北京化学试剂厂生产。 　　茯苓由江苏康缘药业股份有限公司提供，由中国医学科学院药物研究所马林研究员鉴定为茯苓P. cocos，标本保存于药物研究所标本室，标本号ID-S2517。 　　2 提取分离 　　茯苓白色菌核20 kg，用95%乙醇加热回流提取3次，每次分别提取2，1，1 h，合并提取液，减压浓缩得浸膏250 g。将浸膏用水分散后分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别得到乙酸乙酯部分101 g，正丁醇部分77 g，水部分68 g。乙酸乙酯部分与硅胶拌样（1 000 g）后依次用99∶1，49∶1，19∶1，9∶1，0∶1的氯仿-甲醇系统洗脱，得到5个部分，分别为Fr.1～Fr.5。其中Fr.2采用硅胶柱色谱分离，氯仿-丙酮（99∶1～1∶1）梯度洗脱得到Fr.2A～Fr.2G。Fr.2B经制备型HPLC纯化得到化合物1（3 mg），2（13 mg），Fr. 2A用Sephadex LH-20纯化后经制备型HPLC纯化，分别得到化合物3（3 mg），4（4 mg）。 　　Fr.1采用硅胶柱色谱分离，石油醚-丙酮（99∶1～0∶1）梯度洗脱得到Fr.1A～ Fr.1F。其中Fr.1A经Sephadex LH-20反复纯化得到化合物6（9 mg）。Fr.1B经制备型HPLC纯化得到化合物5（16 mg） ，7（8 mg），8（6 mg） ，10（6 mg）。Fr.1D用Sephadex LH-20反复纯化，后经制备型HPLC分离，分别得到化合物9（4 mg），13（8 mg）。 　　Fr.5首先采用RP-C18反相柱色谱分离，甲醇-水（1∶4～9∶1）梯度洗脱得到Fr.5A～ Fr.5F。Fr.5A和Fr.5D经重结晶后分别得到化合物12 （8 mg），11（5 mg）。 　　3 结构鉴定 　　化合物1 白色晶体（甲醇），mp 253～256 ℃ 。ESI-（+）-MS m/z 509[M+Na]+。IR（KBr）νmax：1 681cm-1。1H-NMR（pyridine-d5，300 MHz） δ：1.00（3H，s，H-28），1.06（3H，s，H-29），1.14（3H，s，H-19），0.96，0.98（各3H，d，J=6.6 Hz，H-26，27），1.23（3H，s，H-18），1.47（3H，s，H-30），2.31（1H，m，H-25），2.91（1H，d， J=11.4 Hz，H-17），2.94（1H，m，H-20），4.54（1H，t，J=6.0 Hz，H-16），3.46（1H，t，J=6.0 Hz，H-3） 4.82，4.98（各1H，