蓖麻中的萜类和甾体及抗糖尿病活性研究.docVIP

蓖麻中的萜类和甾体及抗糖尿病活性研究 　　摘要： 运用多种色谱方法从蓖麻地上部分甲醇提取物中分离得到7个萜类化合物和3个甾体化合物，经波谱技术分别鉴定为ficusic acid （1）， 叶绿醇（2） ， callyspinol（3）， 羽扇豆醇（4）， 30-降羽扇豆-3β-醇-20-酮（5）， 羽扇豆-20（29）-烯-3β，15α-二醇（6）， acetylaleuritolic acid（7）， 豆甾-4-烯-3-酮（8）， 豆甾-4-烯-6β-醇-3-酮（9）， 豆甾-4-烯-3，6-二酮（10）， 其中化合物1～3，5～10是首次从该植物中分离得到，体外抗糖尿病活性表明，化合物5，6对小鼠和人11β-HSD具有显著的抑制活性和良好的选择性。 　　关键词： 蓖麻；萜类；甾体；11β-羟基类固醇脱氢酶 　　[收稿日期] 2013-07-08 　　[基金项目] 国家重点基础研究发展计划（973）项目（2011CB512005）；广西自然科学基金项目（2012GXNSFBA053085）；国家重点实验室培育基地-广西壮族自治区药用资源化学与药物分子工程重点实验室基金项目（CMEMR2012-B05）；2012年度广西高等学校优秀人才项目 　　[通信作者] 谭钦刚，副教授，硕士生导师，主要研究方向为中药药效物质基础，Tel：（0773）2295260，E-mail： qgtan77@ 　　糖尿病以慢性高血糖症和其他代谢异常为特征，严重危害人类健康和生命，已成为全球性的公共健康问题，预计到2030年全球糖尿病患者将达到4.39亿[1]。糖尿病的发病原因复杂，相应的治疗靶点多样，如通过抑制11β-羟基类固醇脱氢酶（11β-HSD）的活性，可使糖尿病患者的代谢作用正常[2]；以甘草次酸为代表的三萜类化合物能选择性地抑制11β-HSD 2种同功酶的活性[3]。蓖麻为大戟科蓖麻属植物，广布于全国各地，资源丰富，目前报道的主要有生物碱[4]、酚类和甾醇类[5]、脂质体和糖[6]等。文献研究表明，蓖麻50%乙醇提取液对糖尿病有治疗作用[7]，为了深入研究蓖麻抗糖尿病的物质基础，作者对蓖麻地上部分（无果实）甲醇提取物进行了化学成分研究，采用硅胶柱色谱等分离手段得到7个萜类化合物和3个甾体类化合物，并对分离得到的部分萜类化合物进行了体外抗糖尿病活性测试。研究结果表明，化合物5，6对11β-HSD具有显著的抑制活性和良好的选择性。 　　1 材料 　　质谱用VG Auto Spec-3000质谱仪测定；NMR用Bruker AM-400或DRX-500核磁共振仪测定（TMS为内标）；酶标仪（SpectraMax 190， Molecular Device， USA）；PHS-3TC型精密数显pH计（上海天达仪器有限公司）；薄层色谱检测用UV-210紫外分光光度计。 　　柱色谱硅胶（200～300目），GF254薄层板为青岛海洋化工厂生产；Rp-18（40～65 μm）为德国Merck公司产品；Sephadex LH-20（40～70 μm）为瑞典Pharmacia公司产品；薄层色谱用10%硫酸-乙醇溶液（加热）检测；阳性对照甘草次酸购自Sigma公司，小鼠或人11β-HSD基因购自NIH Mammalian Gene Collection。 　　样品蓖麻采自广西百色，由桂林医学院杜泽乡教授鉴定为大戟科蓖麻属植物蓖麻Ricinus communis L.的地上部分（无果实）。 　　2 方法 　　2.1 提取分离 　　将蓖麻地上部分干燥品（16 kg）粉碎，在室温下用甲醇100 L浸提3次（每次2 d），滤液减压回收，合并回收后的提取物，得到甲醇提取物633 g。用乙酸乙酯提取3次（每次静置3 h），得到乙酸乙酯浸膏325 g，上硅胶柱色谱（200～300目），用氯仿-丙酮（1∶0～1∶1）系统梯度洗脱，得到6个组分（Fr.Ⅰ～Ⅵ）。Fr.Ⅱ经硅胶柱色谱，石油醚-丙酮（20∶1～8∶1）洗脱，采用Rp-18 柱色谱，以甲醇-水（8∶2～10∶0）洗脱，得到化合物2（390 mg），3（500 mg），4（5 g），7（13.1 mg）。Fr. Ⅲ先后经硅胶柱色谱，石油醚-丙酮（10∶1～4∶1）洗脱，Rp-18 柱色谱，甲醇-水（7∶3～10∶0）洗脱，Sephadex LH-20柱色谱，氯仿-甲醇 1∶1洗脱，得到化合物5（324 mg），6（819 mg），8（68.3 mg），10（32.1 mg）。Fr. Ⅳ经Rp-18 柱色谱以甲醇-水（6∶4～10∶0）洗脱，石油醚-丙酮（3∶1～1∶1）洗脱，得化合物9（32.6 mg）。Fr. Ⅴ经Rp-18柱色谱以甲醇-水（4∶6～10∶0）洗脱，经甲醇重结晶，得化