解毒通络注射液对缺血再灌注大鼠脑水肿的防治作用.docVIP

解毒通络注射液对缺血再灌注大鼠脑水肿的防治作用 　　[摘要] 目的： 研究解毒通络注射液（Jiedu Tongluo injection，JDTL）对缺血性再灌注大鼠脑组织含水量变化以及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞间黏附分子-1（VCAM-1）、E-选择素（E-selectin）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响，探讨其对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法：线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，干-湿重法检测脑组织含水量；采用比色法测定脑组织中伊文思蓝（Evans blue，EB）含量反映血脑屏障通透性；酶联免疫吸附法（ELISA）检测脑组织中ICAM-1，VCAM-1，E-selectin表达；免疫组化法检测脑组织MMP-9表达。结果：JDTL 2，4 mL?kg-1可明显降低模型大鼠的脑组织含水量，EB含量，ICAM-1，VCAM-1，E-selectin以及MMP-9的表达（P0.05或P0.01）。结论：解毒通络注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤引起的脑水肿有保护作用，其作用机制与降低模型大鼠脑组织ICAM-1，VCAM-1，E-selectin的表达、抑制脑组织MMP-9的表达有关。 　　[关键词]解毒通络注射液；脑水肿；细胞间黏附分子-1；血管细胞间黏附分子-1；E-选择素；基质金属蛋白酶-9；大鼠 　　解毒通络注射液（Jiedu Tongluo injection，JDTL）是王永炎院士通过多年的临床经验，在“毒损脑络”理论的指导下[1]，采用栀子、三七和灯盏花3味中药有效成分，结合现代制剂工艺研制的，具有清热解毒、活血通络作用的中药注射液。有研究表明[2]，解毒通络注射液能够通过抑制脑缺血后肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达，从而减轻炎性损伤，阻抑脑缺血损伤级联反应，减轻缺血对神经元的损害。本课题组通过线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，并应用解毒通络注射液进行干预，观察脑组织ICAM-1，VCAM-1，E-selectin，MMP-9表达和脑含水量的变化及其之间的关系，以探讨JDTL对缺血再灌注大鼠脑水肿的影响。 　　1 材料 　　1.1 动物 雄性SD大鼠，体重250～270 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK（京）2002-2003。 　　1.2 药品与试剂 解毒通络注射液由北京中医药大学中药学院中药制剂系杜守颖教授提供；阳性对照药尼莫地平注射液（德国拜耳公司）；多聚甲醛（北京化学试剂公司）；考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；大鼠ICAM-1，VCAM-1，E-selectin定量酶联检测试剂盒（北京环亚泰克生物医学技术有限公司）；兔MMP-9多克隆抗体、SABC试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。 　　1.3 仪器 外科手术灯（上海医疗器械五厂）；钓鱼尼龙线（直径0.285 mm）；AX205型天平（梅特勒公司）；Orbital shaker气浴摇床（生命科学公司）；400 R低温离心机（德国Heraeus）；722型可见光分光光度计（上海第三分析仪器厂）；Multiskan MK3型酶标仪（芬兰Thermo Labsystem公司）；DU640型紫外线分光光度计（德国BACKMAN公司）；真空组织脱水仪、平推式石蜡切片机（日本）；真彩色图像分析仪（德国Leica公司）；Olympus显微镜（日本）。 　　2 方法 　　2.1 分组及给药 大鼠随机分为假手术组、模型组、解毒通络注射液高、中、低剂量组（4，2，1 mL?kg-1）、尼莫地平组（0.4 mg?kg-1）。采用舌下静脉注射给药，假手术组及模型组注射等量生理盐水，于插线成功15 min注射给药。 　　2.2 大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型制备 参照Koizumi[3]与Nagasawa[4]方法略加改进制作暂时性大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型。大鼠麻醉，仰卧位固定。分离右侧颈总动脉、颈内动脉及颈外动脉，穿线备用，结扎颈外动脉与颈总动脉，以动脉夹夹闭颈内动脉远心端后，于颈外动脉与颈内动脉分叉处作一切口，从切口处插入头端磨成球形的光滑尼龙线（直径0.285 mm，距头端18 mm处作标记），有阻力感时停止进线并记录缺血时间，插入深度18 mm左右，造成大脑中动脉阻塞。结扎切口处，缝合皮肤。2 h后将尼龙线轻轻抽到近切口处，实现再灌注。假手术组只结扎右侧颈总动脉。脑缺血及再灌注过程中保持室温25 ℃。 　　2.3 脑含水量测定 再灌注24 h断头取脑，左右半脑分开，用滤纸吸干表面水分，分别称量左右脑湿重，105 ℃