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*/10 在线答疑:yanjie@zhku.edu.cn S54y@zhku.edu.cn 大 学 通 用 化 学 实 验 技 术 紫外分光光度法测定水果(或蔬菜)中的维生素C含量 实验93 紫外分光光度法测定水果(或蔬菜)中的维生素C含量 93.1 实验目的 (1) 掌握紫外分光光度计的工作原理及使用方法。 (2) 掌握水果(或蔬菜)中的维生素C含量的测定方法。 93.2 实验原理 紫外快速测定维生素C法,是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性,于243 nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差,通过查标准曲线,即可计算样品中维生素C的含量。 ???(一)标准曲线的制作 ????1.抗坏血酸标准溶液的配制:用分析天平准确称取抗坏血酸10 mg,加2 mL 10%盐酸,加蒸馏水定容至100 mL,混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100 μg·mL-1。 93.3 操作步骤 ?????? 2. 标准曲线的绘制 ? 1 2 3 4 5 6 7 8 标准抗坏血酸溶液加入体积/mL 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.2 9.0 总体积/mL 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 抗坏血酸溶液浓度/(μg·mL-1) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 3.消光值的测定:以蒸馏水为空白,在243 nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值,以抗坏血酸的含量(μg)为横坐标,以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。 (二)样品的测定 1.样品的提取:将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00 g于研体中,加入2~5 mL 1% HCl,匀浆,转移到25 mL容量瓶中,稀释至刻度。若提取液澄清透明,则可直接取样测定,若有浑浊现象,可通过离心(10000 g, 10 min)来消除。 2.样品的测定:取0.1~0.2 mL提取液,放入盛有0.2~0.4 mL 10%盐酸的10 mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白,在243 nm处测定其消光值。 3.待测碱处理液的制备:分别吸取0.1~0.2 mL提取液,2 mL蒸馏水和0.6~0.8 mL 1 mol·L-1 NaOH溶液依次放入10 mL容量瓶中,混匀,15min后加入0.6~0.8 mL 10% HCl,混匀,并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243 nm处测定其消光值。 4.由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线,即可计算出样品中维生素C的含量。 5.也可直接以待测碱处理液为空白,测出待测液的消光值,通过查标准曲线,计算出样品的维生素C的含量。 93.4 计算 ??????????????????? ??? μ×V总 维生素C的含量(μg/g)= ———— ?????????????????? ????? ?V1×W总 式中:μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量 (μg) V1——测消光值时吸取样品溶液的体积(mL) V总——样品定容体积(mL) W总——称样重量(g) 93.5 问题讨论 (1)除了本实验中的方法外,抗坏血酸还有哪些测定方法? (1)除了本实验中的方法外,抗坏血酸还有哪些测定方法? 答:一、氧化还原法 1. 直接碘量法 2. 2,6-二氯酚靛酚滴定法 二、分光光度法 1. 紫外快速测定法 2. 2,4-二硝基苯肼法 3. 高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸 三、光电比浊法 四、电化学法 五、荧光分析法 1. 抗坏铁酸的微量荧光测定法 2. 抗坏铁酸总量的荧光测定法 93.6 参考答案? * * * * * */10 在线答疑:yanjie@zhku.edu.cn S54y@zhku.edu.cn 大 学 通 用 化 学 实 验 技 术 紫外分光光度法测定水果(或蔬菜)中的维生素C含量 * * * * *
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