胎球蛋白A检测剂盒(ELISA酶联免疫法)简介说明书.doc

人胎球蛋白A检测试剂盒（酶联免疫法） （德国DRG EIA4522） 预期用途 此试剂盒可用于血清，血浆，细胞上清，组织提取物和尿液中人胎球蛋白A也称之为α-2-HS糖蛋白的定量的检测；血清或血浆中胎球蛋白A的检测可作为某些癌症及基因遗传缺陷的血清蛋白诊断的辅助工具；此试剂盒仅供实验室专业人士使用 简介 胎球蛋白A也称之为α-2-HS糖蛋白，是由两个氨基末端抑制域和一个较小的羧基末端域组成的59 kDa 分子量的糖蛋白；由肝脏合成，分泌至血流，成年哺乳动物体内的浓度范围在0.5-1.0g/L；婴儿期的血清胎球蛋白A含量高，参与蛋白酶抑制活性，与钙代谢和骨生成调节相关；累积于骨和牙齿内，作为生物学上非胶原骨蛋白的主要部分，研究表明，胎球蛋白A是循环中主要的钙化抑制剂；干涉钙盐沉淀；近期研究显示低水平胎球蛋白A的慢性肾脏衰竭患者与心血管病的高死亡率显著相关；另一方面，糖尿病老年人血清胎球蛋白A含量比正常人高，这是独立于胰岛素抑制剂的其他标记物；另外，高胎球蛋白A水平还可作为心血管疾病的的危险标记物 实验原理 此试剂盒可用于血清样本中人胎球蛋白A的定量检测；采用双位点夹心法，羊抗人胎球蛋白A多抗结合人胎球蛋白A的不同位点 将含人胎球蛋白A的试验标准品，质控品和预稀释样本加至包被了高度亲和羊抗人胎球蛋白A多抗的微孔内，第一次孵育，包被抗体捕获样本中的人胎球蛋白A，未结合的蛋白洗板除去，然后加入HRP标记的抗人胎球蛋白A酶联物加入至每孔，“夹心-人胎球蛋白A-HRP-标记的酶联物”形成夹心，未结合的示踪抗体通过洗板除去，结合于包被板上的HRP酶免物与底物液定时反应，然后在酶标仪上检测；结合于包被胎球蛋白A上示踪抗体酶活性与样本中胎球蛋白A的含量直接相关，在点对点或三次回归模式下以标准品的浓度比上OD值绘制标准曲线，样本中的胎球蛋白A可直接从标准曲线上得到 试剂：准备与贮存 此试剂盒收到后立即贮存于2-8℃下，效期见试剂盒标签；所有成分在2-8℃下可保存至有效期 使用前，所有试剂平衡至室温，不同批次的试剂不能交换使用 包被板，96孔，包被了抗人胎球蛋白A抗体；微孔板固定于板架上，密封于含有干燥剂的铝箔密封袋内；贮存于2-8℃至有效期 胎球蛋白A示踪抗体，1瓶，0.6 ml，浓缩，HRP标记的抗人胎球蛋白A示踪抗体溶于稳定的蛋白基质中；此试剂使用前需用示踪剂抗体稀释液进行稀释；贮存于2-8℃至有效期 示踪抗体稀释液，1瓶，11ml，即用，Trizma盐酸溶于缓冲液；根据实验步骤用于示踪抗体稀释；贮存于2-8℃至有效期 试验缓冲液，浓缩，1瓶，11ml，含牛血清白蛋白的磷酸缓冲盐；建议使用前以1:10比例用双蒸水稀释（如11 ml浓缩+99 ml的双蒸水）；贮存于2-8℃至有效期 洗涤液，浓缩，1瓶，20ml，30倍浓缩；试验前需用580ml的双蒸水稀释，混匀；一旦稀释，不含叠氮化物防腐剂的磷酸缓冲盐洗涤液会含表面活性剂；稀释的洗涤液在室温下可保存至效期 HRP底物液；1瓶，12ml，含过氧化氢的TMB底物液；贮存于2-8℃至有效期 终止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸，贮存于2-8℃至有效期 胎球蛋白A标准品，5瓶，含胎球蛋白A，不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质；各标准品浓度见瓶子标签；3次冻存周期使用后，所有标准品保存至-20℃或更低 胎球蛋白A质控，2瓶，含人胎球蛋白A，不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质，各质控的精确浓度范围见瓶子标签，3次冻存周期使用后质控保存至-20℃或更低 安全注意事项 此试剂用于临床参考实验室，仅供医生或实验室专业人士体外诊断用 若试剂是有潜在感染风险的，试验操作和处理时应戴手套 避免接触含TMB，过氧化氢，硫酸的试剂，TM,B会刺激皮肤和粘膜，导致皮肤过敏反应；TMB还可能是致癌物质；皮肤接触到硫酸会导致严重灼伤，不要接触到眼睛，皮肤，衣服，不要吸入烟雾，一旦接触，应立即用大量水冲洗至少15min 良好实验室操作规范 实验所需材料但试剂盒未提供 精确的单通道移液器，10-25-100-1000ul 适于100 ul的可重复用分液器 适于所有体积的一次性枪头 一次性玻璃管或塑料管12x75mm或13x100mm 带盖的一次性塑料瓶；100-1000ml 铝箔纸 双蒸水或去离子水 塑料盖板或聚乙烯薄膜 多通道洗涤瓶或全自动（半自动）洗板系统 酶标仪，450nm 样本采集 人胎球蛋白A的检测所需血清或血浆样本量仅10 ul 个人在采样前无需特殊准备，全血采集，室温下立即凝集30min，然后离心分离出血清（850-1500 xg 10min）。全血采集3小时内需将血清从凝集中分离出来，转移至另一干净试管；血清样本可保存在-20℃或更低，避免超过三次的冻融 建议采用24小时尿液来检测尿液中的