双水相体系提前黄酮.docVIP

双水相体系提取黄酮 1．双水相：两种可溶于水的物质达到平衡时形成两个液相。 根据热力学第二定律，混合是熵增过程可以自发进行，但分子间存在相互作用力，这种分子间作用力随相对分子质量增大而增大。当两种高分子聚合物之间存在相互排斥作用时，由于相对分子质量较大的分子间的排斥作用与混合熵相比占主导地位，即一种聚合物分子的周围将聚集同种分子而排斥异种分子，当达到平衡时，即形成分别富含不同聚合物的两相。这种含有聚合物分子的溶液发生分相的现象称为聚合物的不相溶性。 　　可形成双水相的双聚合物体系很多，如聚乙二醇（PEG）/葡聚糖（Dx）,聚丙二醇/聚乙二醇，甲基纤维素/葡聚糖。双水相萃取中采用的双聚合物系统是PEG/Dx，该双水相的上相富含PEG，下相富含Dx。另外，聚合物与无机盐的混合溶液也可以形成双水相，例如，PEG/磷酸钾（KPi）、PEG/磷酸铵、PEG/硫酸钠等常用于双水相萃取。PEG/无机盐系统的上相富含PEG,下相富含无机盐。 2.（1） 硫酸铵—乙醇双水相提前，配制按醇水比0.7（V/V），硫酸铵浓度为0.27g/mL 配制双水相，在料液比1:25（m/V）。硫酸铵取盐析作用。 2 料液比的影响，料液比不宜过大或过小。 因为植物细胞内的黄酮化合物都是以苷键、酯键等疏水键与蛋白质、多糖等结合，要将黄酮浸出，首先是溶剂进入细胞内破坏疏水键。料液比小， 溶剂渗透并扩散到植物细胞内的速度以及黄酮化合物溶剂中扩散的速度小，料液比太大，虽然有利于溶剂进入细胞内破坏疏水键， 也有利于黄酮化合物向溶剂中扩散，但溶剂用量多，会造成分相盐用量增大， 影响双水相的稳定性， 导致黄酮提取率减小。 2 醇水比的影响醇水比通过影响双水相稳定性而影响总黄酮提取率。（3）分相盐浓度影响 双水相体系分离技术主要是通过铵盐的盐析作用达到分离目的，因此，铵盐浓度将直接影响提取效果，为了考察硫酸铵浓度对黄酮提取率的影响 （4）提取时间的影响，由于提取时需要加热，长时间在温热环境下可能会有部分黄酮被空气氧化。 3. 硫酸铵取盐析作4．参考文献 双水相体系协同超声提取法分离金银花总黄酮。许灵君，欧阳玉祝，吴道宏，杨东东 苎麻叶中黄铜的提取工艺研究。贺波1.2.1 乙醇-硫酸铵双水相体系制备 乙醇-硫酸铵双水相体系按参照文献[13]制备。 在无水乙醇中加入一定浓度的硫酸铵水溶液， 利用 硫酸铵的盐析作用形成双水相体系， 通过改变乙醇 与水的比例和硫酸铵的用量控制双水相体系的形 成。 1.2.2 金银花总黄酮的提取分离 取2.0g 干燥金银花粉末于100mL 圆底烧瓶中， 按一定料液比加入不同醇水比和分相盐浓度配制的 乙醇-硫酸铵双水相溶液，50℃温度下超声提取一定 时间，抽滤，滤液静置，分液，上层于50mL 容量瓶中 用60%乙醇定容，测定总黄酮浓度。 1.3 分析方法 1.3.1 标准曲线的绘制 总黄酮分析用芦丁做标样，按参考文献[4]配制系 列标准溶液，用紫外可见分光光度计测510nm 处吸 光度，绘制浓度-吸光度标准曲线，并进行线性回归 得回归方程。 C 0.0939A R2 0.9998 式中C 为总黄酮浓度，mg/mL；A 为溶液的吸光 度。 1.3.1 样品总黄酮的分析 按参考文献[4]取1mL 待测液置于25mL 容量瓶 中， 加5.0mL 去离子水， 加入5%亚硝酸钠溶液 1.0mL， 摇匀， 放置6min， 加入10%硝酸铝溶液 1.0mL，摇匀，放置6min；再加入4%氢氧化钠溶液 10.0mL，加去离子水至刻度，摇匀，放置15min，用紫 外可见分光光度计测510nm 处吸光度。将吸光度代 入回归方程计算总黄酮浓度和样品中总黄酮质量， 按下式计算总黄酮提取率。 总黄酮提取率/% 提取液中总黄酮质量/g 金银花粉末质量