甲胎蛋白(AF)测定(化学发光法).doc

西安长安医院 检 验 科 甲胎蛋白 AFP 测定 化学发光法 文件编号：CA-JY-CZ-MY 第 二 版 执行日期：2010-1-4 共5页 第1页 １　?原理 AFP是胚胎时期的重要血清成分，由内黄囊和肝细胞合成，胎儿出生后其浓度急剧下降，几个月至一年可降至正常水平，正常值小于20ng/ml。本检验科使用日本东曹AIA-1800型全自动免疫发光分析仪进行 测定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技术 MEIA 。双抗体夹心法原理已包被了抗体的塑料微珠试剂中加入待测标本后经温育再加入碱性磷酸酶标记的抗体形成抗体抗原酶标记抗体复合物然后将其转移到玻璃纤维柱上用缓冲液洗涤没有结合的抗原酶标抗体被洗掉结合抗原抗体的塑料微珠则被保留在纤维柱滤膜的上方。这时再加入底物4-甲基伞型酣磷酸盐 4-Mup 。酶标抗体上的碱性磷酸酶将4-Mup分解,脱磷酸后形成甲基伞型酣 4-Mu 它在365nm激发光的照射下发出448nm的荧光经过荧光读数仪的记录放大计算出所测物质的含量。??试剂3.1 所有试剂均购自日本东曹公司 TOSOHⅡ相关校准品 TOSOHⅡ相关校准品1 TOSOHⅡ相关校准品2 TOSOHⅡ样本稀释液 TOSOHⅡ基质：4-甲基伞形酮酰磷酸 TOSOHⅡ基质溶解液 TOSOHⅡ清洗液 TOSOHⅡ缓冲液 3.2 试剂准备与检查： 从冰箱中取出1号液（底物液）放入仪器 从冰箱中取出相关测试试剂放入仪器 检查所有试剂和缓冲液是否在有效期内，超过有效期的试剂不可使用 检查所有试剂和缓冲液是否足够 检查所有消耗品（纤维杯或反应杯）是否足够，废液或废物是否清空 3.3 试剂保存条件： 试剂盒、标准品、质控品在2℃-8℃保存。 3.4 试剂性能可接受性： 按测定项目资料手册中质量控制章节所规定内容进行质量控制，结果必须在实验室规定的可接受范围内。 4 ??操作步骤 1 开机前检查 a 察看电源是否正常安全通电 b 推主机下部的前门，打开后检查洗净水与分注液的用量是否满足当日用量废试样杯与废吸嘴是否丢弃 2 开机 a更换75%酒精，放置基质液 b 打开电脑主机及AIA-1800电源, 点击主业面进入root c 试样吸嘴的设置及酶标识试剂，检体稀释液的设置，按主机操作版面Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩，将酶标识试剂，检体稀释液设置在试剂托架上，将条形码标识面朝前 d 试剂杯的设置，按主机操作版面的Cup Sorter键，LED指示灯变为绿色，拉开分类器抽屉将试剂托盘设置在分类器托盘上，将分类器抽屉推到底 3 开机日检 4 日检通过后，进行标本检测，在树形菜单上进入界面设置标本检测项目，Assay键点击开始测定 5 测定完毕后，按主机操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩及分类器抽屉，收集试剂放入冰箱，更换基质液，放置75%酒精 6 点击关机，待窗口消失，关闭AIA-1800电源，在关闭电脑及主电源 5 质量控制： 每批试剂都要使用东曹公司标准品作质量控制，请参见AIA-1800仪器操作手册。 ?6 ?结果计算（定量分析）： 利用点对点数据产生方法来产生标准曲线，并根据标准曲线机器会自动计算最终样品浓度； 7 报告格式： 各种定量单位通常采用ug/L 8 参考值： 0-10.9ug/L 9 ??临床意义： 原发性肝癌患者血清AFP约有75%－80%的阳性率。一般认为AFP 350时对原发性肝癌有较高的诊断价值。 胃癌或胰腺癌时血中AFP含量也可升高。 病毒性肝炎、肝硬变时AFP也有不同程度的升高，但其水平常在100ng/ml以下。 妊娠妇女的不同时期血清中AFP亦有不同程度的上升。 10 方法学性能: 精密度：采用NCCLS中的EPS-T2标准，测WithinRun,BetweenRun,Re-tweenDay和Total四个方面进行精密度的评价，检测方案为：测6套以上的血清盘，（每套3个以上的样品），在3-4个试验点，每天分两个时间段，每个样品做复管（每个样品累计测80次以上），连续测20天以上，使用一个以上批号试剂和标准曲线。总的CV%值控制在8%以内。 正确度（准确度）：采用与东曹原有的商品化试剂或市售的其他经典的商品化试剂（如：HPLC或RIA）进行相关性的比较，回归方式一般采用Least Squares Linear Regression和/或Passing-Bablok Linear Regression方式，比较Intercept（截距），Slope 斜率 和Correlation Coefficient（相关参数）等参数，并注明参与比较的样品类型，数量和样品的浓度范围。 rational concept