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薄层色谱分析技术 阅读笔记 概念： 薄层色谱法（TLC，thin layer chromatography）又称薄层层析，是一种基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配或保留而将其分离的方法。 还可定义为：以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板（如玻璃板、塑料片、金属片等）上，形成薄层（常用厚度为0.25毫米左右）后，在此薄层上进行层析分离的分析方法。薄层层析是把支持物均匀涂布于支持板(常用玻璃板，也可用涤纶布等)上形成薄层，然后用相应的溶剂进行展开。薄层层析可根据作为固定相的支持物不同薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。将样品溶液用毛细管点在薄层板的一端，置密闭槽中，加入适宜溶剂为流动相。由于毛细管原理，溶剂被吸上，沿板移动，并带动样品中各组分向前移动，这个过程称为展开。由于各组分性质不同，移动距离不同，展开一定距离后，即得互相分离的组分斑点。可用适当方法使各组分在板上显示其位置，如组分本身有颜色，即可直接观察，否则可喷显色试剂或在紫外灯下观察荧光等办法确定斑点位置。物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。 例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的Rf值对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以定量。?时间较短一般仅需15～20分钟分离效果较好样品少量（几到几微克，甚至0.01微克）的分离是一种较实用、有效的微量分离分析方法；还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂一块板上可同时分离许多样品。除低沸点物质外，各种无机和有机化合物都可进行分离。可用于分离制备大于500mg较大量的样品，使用较大较厚的薄层板将样品溶液在起始点处点成条带状，可分离精制毫克量样品。薄层层析的缺点是对生物高分子的分离效果不甚理想。 此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。通常用比移值Rf表示组分移动的特性，Rf值是定性分析的重要指标。其定义为：Rf=组分移动的距离/溶剂前沿移动的距离=原点至组分斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离。在薄层、溶剂、温度等各项实验条件恒定的情况下，各物质的Rf值是不变的，它不随溶剂移动距离的改变而变化。Rf与分配系数K的关系：Rf=1/(1+αK)，α是由薄层性质决定的一个常数。由此可见，K值愈大，溶质分配于固定相的趋势愈大，而Rf值愈小；反之，K值愈小，则分配于流动相的趋势愈大，在流动相、固定相和展开条件固定时，Rf值是组分的特性，可用以进行定性鉴别。实用时也常将样品与已知纯物质同时展开，比较二者移动情况，进行定性分析。选择所选吸附剂应具有最大的比表面积和足够的吸附能力，它对欲分离的不同物质应有不同的吸附能力，即有足够的分辨力吸附力的强弱规律可概括如下：吸附力与两相间界面张力的降低成正比，某物质溶液中被吸附的程度与其在溶剂中的溶解度成反比。极性吸附剂易吸附极性物质，非极性吸附剂易吸附非极性物质。同族化合物的吸附程度有一定的变化方向，例如，同系物极性递减，而被非极性表面吸附的能力将递增。 所选吸附剂与溶剂及样品组分不会发生化学反应主要考虑两方面：一是支持剂的性质与适用范围薄层层析的支持剂较常用的是硅胶、氧化铝、硅藻土、纤维素、聚酰胺及DEAE—纤维素。 (1)硅胶 ? 硅胶是应用最广泛的一种极性吸附剂。它的主要优点是化学惰性，具有较大的吸附量，易制备成不同类型、孔径、表面积的多孔性硅胶，一般以SiO2?xH2O通式表示。硅胶的吸附活性取决于含水量，吸附层析一般采用含水量为10%～12%的硅胶，含水量小于1%的活性