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抗原抗体反应的特点 特异性 可逆性 阶段性 可见现象 抗原抗体结合的特异性 抗原分子上的表位和抗体分子V区中的超变区互相适应所决定的。 - 交叉反应(cross reaction)：多数的天然抗原物质,如微生物抗原,常具有多个不同的表位,如果两种不同的抗原物质具有部分相同或类似结构的表位，则与抗体血清反应时可出现交叉反应。 （一）凝集反应（agglutination） 颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。 indirect agglutination 载体颗粒 红细胞（O型人红细胞，羊红细胞及兔红细胞）→间接血凝实验 聚苯乙烯乳胶颗粒→间接乳胶凝集试验 活性碳→间接碳凝集试验 （二）沉淀反应（precipitation） 概念及原理: 适宜浓度的抗体预先在琼脂中混匀后制成琼脂凝胶板，以适当距离打孔，将可溶性抗原至孔中，抗原向周围扩散，与琼脂中抗体相遇，开始时形成可溶性的抗原－抗体复合物（抗原过量）当更多的抗原到达，与抗体比例适宜时，出现晶格和沉淀。沉淀环的直径与孔中抗原浓度呈正相关，可根据沉淀环直径大小从预先绘制成的标准曲线查出待测标本中抗原含量。本试验方法简单，容易观察结果，可测定抗原的灵敏度约为10～20μg／ml. 应用: 常用于人或动物血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量检测。缺点需要经1～2天结果。 免疫电泳（Immunoelectrophoresis) 是先将待侧血清标本作琼脂凝胶电泳，血清中各蛋白组分被分成不同的区带，然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应的抗血清，把分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散，在各区带相应的位置形成沉淀弧。该法常用于血清蛋白种类分析，以观察Ig的异常增多或缺失。 （三）补体参与的抗原抗体反应 1、50 %补体溶血试验（CH50测定） ——血清总补体量测定 酶：辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶 间接法 双抗夹心法 竞争法 E: 辣根过氧化酶 HRP S: 底物 二氨基联苯胺 DAB/邻苯胺 酶联免疫斑点法 （Enzyme-Linked Immunospot, ELISPOT) RIA法原理及标准曲线 ?特点： 放射免疫分析灵敏度高(0.001pg／ml)，特异性强，但同位素具有不稳定，污染环境等缺点。 ? 将发光物质(常用Luminol)标记抗体或抗原进行反应，以发光现象作为抗原抗体反应的指示系统，可定量检测抗原或抗体。其原理与免疫荧光技术、免疫酶技术和同位素标记技术相似。据发光物质的来源不同，分为化学发光(chemiluminescence)和生物发光（bioluminescence）。 化学发光的原理： 发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激发下生成激发态分子，当这些分子回到基态时，伴随光子的释放，发生化学发光现象。常用发光剂有鲁米诺（luminol ）、丫啶酯等。 用途： 用于吞噬细胞、NK细胞功能的检测，需要专门的测定仪器。 免疫印迹法(Immunoblotting) 是将凝胶电泳与固相免疫测定结合，先把电泳分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免疫等技术测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量。常用于检测多种病毒 如HIV 的抗体或抗原。 淋巴细胞类型和数目的测定 1）花结试验：E花结试验可用于检测T细胞数目。EA花结试验可用于检测B细胞数目。 2）免疫荧光法：常采用间接免疫荧光法。 3）流式细胞术：借助流式细胞仪（FCM)。 ? 直接法：将抗细胞表面分子的特异性抗体与磁性微球交联，形成免疫磁珠（immune magnetic bead, IMB），将其与细胞悬液混合共育，IMB可与表达相应表面分子的细胞结合，再以强磁场分离IMB及所结合的细胞，达到分选特定细胞的目的。 间接法：用第二抗体与磁性微粒交联，再与已结合第一抗体的细胞反应，从而对细胞进行分离。 疫苗 ——应用微生物制备的具有免疫原性的物质。包括灭活疫苗（死疫苗）和减毒活疫苗。如 麻疹疫苗，脊髓灰质炎疫苗，乙肝疫苗等。 类毒素——将细菌毒素用甲醛减毒后制备的具有免疫 原性的物质。如喉类毒素，破伤风类毒素。 人工主动免疫 常用制剂——疫苗、类毒素 死疫苗（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。伤寒菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体、流感病毒、狂犬病病毒、乙脑病毒疫苗均为灭活疫苗。 减毒活疫苗：是用