222动物细胞融合与单克隆抗体课件.pptVIP

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 复习: 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，以及动物细胞融合后还有什么用途呢？ 一动物细胞融合 动物细胞融合的概念: 一用灭活的病毒诱导的动物细胞融合过程示 为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 不能，因为不灭活的病毒会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 动物细胞融合的具体过程是否也和植物原生质体融合的过程一样呢？  比较： 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导手段 用 途 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 两项技术都有细胞融合过程 【例】 动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是 D A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段完全相同 C.所采用的原理完全相同 D.都能形成杂种细胞 二.单克隆抗体 复习 抗体（1）概念： 机体受抗原刺激后产生的，并且能与之发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 免疫的过程 B淋巴细胞有什么特点？ B淋巴细胞能产生抗体， 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 传统的抗体生产方法及缺陷是什么？ 传统的抗体生产方法是向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需要的抗体。这种生产抗体的方法产量和纯度都很低，而且制备的抗体特异性差。 骨髓瘤细胞的特点是： 在体外大量增殖 B淋巴细胞特点是： 抗体生产 在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的，那么，科学家是怎样解决这一问题的呢？ 如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时 能利用细胞融合技术来制备单克隆抗体吗？ 科学家的发现 阿根廷科学家米尔斯坦（Cesar Milstein，1926—）和德国科学家柯勒（Georges Kih1er，1946—）在前人工作的基础上，继续探索和尝试，并且充分发挥想象力，设计了一个极富创造性的实验方案。他们想到，如果用一种能在体外培养条件下大量增殖的细胞，如小鼠骨髓瘤细胞，与某一种B淋巴细胞融合，所得到的融合细胞就能大量增殖，产生足够数量的特定抗体，根据这个设想，他们首先将抗原注射入小鼠体内，然后从小鼠脾脏中获得能够产生抗体的B淋巴细胞，与小鼠骨髓瘤细胞在灭活的仙台病毒或聚乙二醇的诱导下融合，再在特定的选择性培养基中筛选出杂交瘤细胞。由于杂交瘤细胞继承了双亲细胞的遗传物质，因此，它不仅具有B淋巴细胞分泌特异性抗体的能力，还有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的本领。他们培养杂交瘤细胞，从中挑选出能够产生所需抗体的细胞群，继续培养，以获得足够数量的细胞，在体外条件下做大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖。这样，从细胞培养液或小鼠的腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体了。 单克隆抗体制备过程 3.单克隆抗体 制备过程 归纳 单克隆抗体制备需要的条件： 一是能产生单一抗体的效应B细胞。 二是能够无限增殖的骨髓瘤细胞。 （2）应用 １可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点 ２可用于疾病治疗 ３可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的 “生物导弹“。） “生物导弹”＝单克隆抗体＋药物  1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。 2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体 * 原理:动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是相同的 细胞膜的流动性 方法:诱导融合的方法类似 不同之处是用到灭活的病毒作为诱导剂 用途:是制备单克隆抗体。 制备单克隆抗体的技术之一 克服远源杂交不亲和，获得杂种植株 用 途 同上，再加灭活的病毒诱导 使细胞分散后诱导细胞融合 细胞膜的流动性杂种细胞 动物细胞融合 都有杂种细胞形成 离心、电刺激、振动、显微操作、聚乙二醇等试剂诱导 去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞的全能性形成植株 植物体细胞杂