转基因番茄的研究进展详细分析.ppt

目前抗病的转基因番茄主要包括抗病毒、抗真菌及抗细菌病害等3个方面的研究内容。 烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、苜蓿花叶病毒(AMV)和番茄黄花卷叶病毒(TYLCV)等是引起番茄病毒病的主要病原。在番茄转基因抗病毒育种中，主要利用病毒的外壳蛋白(Coat protein,CP)基因、复制相关蛋白(Replication-associated protein，REP)基因、卫星RNA基因和病毒片段的反义RNA基因等。外壳蛋白(CP)在转基因植物中的积累可以干扰病毒脱衣壳，抑制病毒在植物体中的复制、转运和积累从而使转基因植株获得了病毒抗性。 番茄的细菌病害主要有细菌性斑点病、青枯病及溃疡病等。早在1999年Tai等人利用转基因技术将来源于辣椒的Bs2基因(细菌性斑点病抗性基因)转入番茄中，获得的转基因植物对由黄单孢菌(Xanthormonas campestris)引起的细菌性斑点病的抗病性明显提高。 2009年Chen等将水稻的丁质酶基因和苜蓿的防御素基因同时转化到番茄中，经接种灰霉病病原菌灰葡萄胞菌（Botrytis cinerea）鉴定，同时含这两种基因的转基因植株表现出对灰霉病的高抗性。植物的植保素和抗菌蛋白在植物受到病原菌侵染时可以调动自身的防御反应，加强抗病性。 2003年熊爱生等通过将ACC氧化酶和ACC合成酶反义RNA融合基因导入番茄，转基因番茄DR．1和DR．2株系果实贮藏期较对照合作903延长30--40天以上，常规条件下果实可贮藏50天以上，表现明显耐贮特点。 2004年魏绍冲等对番茄的6个乙烯受体基因进行序列分析时发现，Nr（never ripe）突变体是由NR(LeETR3)蛋白36位上单个碱基突变，使脯氨酸（Pro）变成亮氨酸（Leu），突变体除果实不能正常成熟外，还显示出乙烯不敏感突变株的多效突变效应，具体表现为：不表现乙烯的三重反应，叶柄不易脱落，叶和花瓣衰老进程明显推迟。 人类酸性成纤维细胞生长因子(aFGF，FGF一1)是成纤维细胞生长因子超家族成员。来自于三个胚层的多种细胞都可以表达aFGF。aFGF在治疗帕金森综合症、急性脊柱扭曲性损伤、断指中神经功能重建、脑缺血、肾缺血、心肌梗塞、闭塞性脉管炎、视网膜缺血、胃溃疡及难愈合性伤口等多种临床应用方面具有巨大潜力。 2003年王仁厚利用转基因番茄表达人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)，通过构建的双元表达载体带有一个经过改构的人酸性成纤维细胞生长因子基因(afgf),载体上的选择标记基因为manA,它使得转化过程中可以使用PMI这种不含抗生素及除草剂的选择系统。利用农杆菌介导的转化方法获得了afgf转基因番茄植物,并且通过PCR-Southern、RT-PCR证明了afgf在宿主基因组中的整合及表达。 葡激酶( Staphylokinase，SAK) 是由金黄色葡萄球菌分泌的一种纤溶酶原激活剂，首次发现于 1948 年，它可以激活人体中的血纤维蛋白溶酶原形成血纤维蛋白溶酶，从而溶解血栓。同其他溶栓药物相比，葡激酶具有溶栓效果好，纤维蛋白选择性强，无显著促凝血作用等优点。 2011杜景川等人利用农杆菌介导的方法，将葡激酶( Staphylokinase，SAK) 基因导入番茄中。经 PCR、Southern 杂交和 Northern 杂交检测，葡激酶基因已整合到再生番茄植株基因组中，共获得 8 个转基因株系。经 ELISA 检测，转基因番茄的果实和叶片均能表达 SAK 蛋白，SAK 蛋白在果实和叶片可溶性蛋白中的比例最高分别为3.42%和2.47%。转基因番茄中的 SAK 蛋白具有一定的溶栓活性，溶栓比活力为 3 866 AU·mg－1。 2003年陈溪利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素，通过以口服方式摄入胰岛素来研究在抑制自身免疫攻击以及预防I型糖尿病中所起到的作用，己经取得了很大的进展。 2006年, Chen等人将肠道病毒EV71的外壳蛋白VP1基因导入番茄,外壳蛋白VP1在转基因番茄中获得了表达.用转基因番茄喂食小白鼠,小白鼠可以抗肿瘤细胞的感染。 2007年,刘凤娟等人将卡介苗保护型抗原基因fbpA导入番茄,该基因在转基因番茄中获得了表达,为研究新型抗结核植物疫苗创造了条件。 2008年王逸群利用农杆菌介导法将乙肝病毒表面抗原基因转入番茄,获得了转基因植株.经GUS组织化学染色、PCR扩增以及PCR-Southern检测,证明乙肝病毒表面抗原基因已转入番茄基因组中。 转基因安全问题仍然是人们要考虑的重要问题，目前人们对其安全性