荧光免疫层析技术原理进展.详细分析.ppt

中科院报道了一种用于免疫活性检测的UCP试纸条读数计，采用半导体激光器作为光源，CCD作为光电接收器，步进电机带动控制试纸条移动的装置 UCP应用举例 军事医学科学院研制出一种UPT十通道免疫层析试纸盘，同时检测多种抗体以确证是否感染鼠疫菌 霍乱弧菌—霍乱—烈性肠道传染病 甲胎蛋白(AFP）-肝癌的特异性指标。 3 量子点 量子点( quantum dots，QDs)，主要指主族Ⅱ～ Ⅵ( 如 CdSe) ，Ⅲ～ Ⅴ( 如 InP、InAs、GaSe) ，副族化合物以及 Si 等元素组成的纳米颗粒 ①QDs 有可精确调谐的发射波长，通过调整粒子尺寸可得到不同发射光谱，即可使用大小不同的同种 QDs 颗粒实现不同颜色标记。 ②较大的Stokes 位移和狭窄对称的荧光谱峰。 使得用同一激发光源可同时激发不同大小的量子点，产生不同发射光谱，使同步检测多样本成为可能。 ③QDs 荧光性质稳定，可长期保存，经受反复多次激发。 ④生物相容性好 物理结合 化学偶联 量子点是一种新的荧光标记物，目前在免疫层析中得应用相对UCP，胶体金较少见报道。 张国华，赖卫华等，量子点标记免疫层析试纸条快速检测莱克多巴胺的研究[J]，2009，以CdSe为标记物，对莱克多巴胺(一种苯酚胺类β-肾上腺素激动剂)快速定量检测。 胡华军，付 涛等，CdTe / ZnSe 核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究，2010,检测克伦特罗( Clenbuterol，CLE) —属于 β-兴奋剂类药物,又称“瘦肉精” 量子点在免疫层析中的应用 4有机纳米粒子 荧光素衍生物等荧光染料类有机纳米粒子是早期常用于免疫层析技术中的一大类标志物，如异硫 氰酸酯荧光素，标记原理基本都是利用荧光分子中的异硫氰酸根为反应基团，与蛋白分子中的氨基结合，实现对蛋白的标记，同时以分子中的荧光素为检测信号，早期应用研究较多。有机纳米粒子的荧光发射依赖于粒子本身的化学发光集团不具有无机纳米粒子的波长可调控的尺寸效应。 5纳米磁性颗粒 纳米磁性颗粒( magnetic nanoparticle，MNs) 也被称为超顺磁颗粒，它结合了磁性粒子和纳米材料的优点，具有粒径小、超顺磁性和比表面积大等特性。 典型的是以磁性材料四氧化三铁. 表面引入活性基团，通过耦联反应与酶、抗体等生物分子结合形成生物标志物. 超顺磁性. 6碳纳米管 碳纳米管( carbon nanotubes，CNTs) 的结构可看成是石墨的六角形网格结构发生一定弯曲而形成的空间拓扑结构。 CNTs 作为生物分子标志物的原理与胶体金类似，其明显的黑色在定性或半定量检测中肉眼即可见。 目前无论用何种方法制备 CNTs，均难以去除其中混杂的无定形碳、石墨碳碎片等杂质，这些杂质与 CNTs 混杂在一起，严重限制了 CNTs的研究与应用[1]. [1]王倩倩，颜红侠，李朋博，等． 碳纳米管的纯化、性能及应用［J］． 化学工业与工程，2010，27( 3) : 259-265． 荧光免疫层析技术的原理与进展 荧光免疫层析技术的基本原理 层析法(chromatography)的原理是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)而建立来的一种分离技术。 层析系统是由固定相(stationary phase)和流动(Mobile Phase)相组成。 固定相是固体物质或固定于固体物质上的成分。 流动相是可以流动的物质，如水或各种溶剂。 层析过程：当待分离混合物随流动相通过固定相时，由于混合物各组分的理化性质的差异，与固定相相互作用弱的组分随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的速度快；与固定相相互作用强的组分向前移动的速度慢。从而实现混合物中各组分的分离。 免疫层析法 免疫层析技术是建立在层析技术和抗原一抗体特异性免疫反应基础上的一项新兴免疫检测技术。 免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 游离物在C线处发生免疫反应。 待测物 层析方向 免疫反应 T C 免疫层析技术基本原理示意图 荧光（fluorescence） 荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式释放出能量，称为荧光。 发射光谱和激发光谱 发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下记录的样品发射荧光的强度。 激发光谱是指固定检测发射波长