临床病例中病原细菌的分离与鉴定.doc

实践五 临床病例中病原性细菌的分离与鉴定 目的要求 初步掌握动物疫病检测的采样技术、病原微生物的接种、分离、培养、纯化技术及鉴定技术 练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。 实验原理 为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各种方法分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离 实验材料 样品：临床病例 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、肉汤培养基、三糖铁培养基。 无菌水：装有45mL无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。 试剂：1万U/mL链霉素液、10％苯酚；剪刀，镊子，手术刀，冰块，保温盒，酒精灯 4.沙门菌检验步骤 ┌──────── ┐ │ 检 样 │ └┬───── ─┬┘ ┌──────┴┐ ┌┴───────────┐ │前增菌法， │ │直接增菌法 │ │冻肉,蛋品,乳品│ │鲜肉,鲜蛋,鲜乳或其他未经│ │及其他加工食品│ │加工的食品25g＋灭菌生理 │ │25g+BP 225mL │ │盐水25mL，做成检样匀液 │ └──┬────┘ └───┬────────┘ 36±1℃┌─┴─┐一般4h,干蛋品18-24h ├───────┐ ┌────┴─┐┌┴─────┐ ┌───┴────┐┌─┴───┐ │10mL＋ MM ││10mL＋SC100ml│ │检样匀液25mL＋ ││检样匀液25mL│ │ 或TTB 100ml│└───┬──┘ │MM（或TTB 100mL ││＋SC100ml │ └─┬────┘ 36±1℃│ 18-24h └─┬──────┘ └┬────┘ 42℃│18-24h │ 42℃│18-24h 36±1℃│18-24h │ ┌────┐ │ ┌── ┴────┐ │ └──┤ BS ├─┘ │DHL HE、WS、SS ├───┘ └───┬┘ └┬──────┘ 36±℃ │ 40~48h │ 36±℃ 18-24h ┌┴─────── ┴┐ │ 挑取可疑菌群 │ └───┬──── ─┘ ┌───────┴────────────────┐ │ TSI 斜面、底层、产气、H2S），蛋白胨水（靛基质） │ │ 尿素（PH 7.2）,KCN，赖氨酸 │ └┬──────┬───────┬───────┬┘ ┌─────┴─┐┌───┴───┐┌──┴────┐┌─┴────┐ │H2S＋靛基质－ ││H2S＋靛基质＋ ││H2S－靛基质－ ││非如左述的 │ │尿素－KCN－ ││尿素－KCN－ ││ 尿素－KCN－ ││各种反应结果│ │赖氨酸＋ ││赖氮酸＋ ││ 赖氨酸＋/- ││ │ └─────┬－┘└───┬───┘└──┬────┘└┬─────┤ │ ┌────┴──┐ ┌──┴───┐ │ │ │甘露醇,山梨醇 │ │ ONPG │ │ │ └────┬──┘ └──┬───┘ │ ┌─────┴─┐ ┌──┴────┐┌─┴────┐┌─────┐ │ 沙门氏菌 │ │ 沙门氏菌 ││非沙门氏菌 ││非沙门氏菌│ │ 血清学试验 │ │ 血清学试验 │└─┬────┘└┬────┘ └──┬────┘ └───┬───┘ │ │ └──────────┼──────┴──────┘ ┌──┴────┐ │报 告 │ └───────┘ （三）微生物的培养 制平板：每组制培养皿3付。 在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 病原性球菌分离鉴定 常见的病原性球菌，根据革兰氏染色性不同，可分为革兰氏阳性的葡萄球菌、链球菌、肺炎 双球菌及革兰阴性的脑膜炎球菌、淋球菌等。这类球菌广泛的分布于自然界和健康人皮肤， 鼻咽腔及肠道。当机体抵抗力降低或在医疗实践中无菌操作不严格时，常常引起化脓性感染 ，故又把这类球菌称为化脓性球菌。 脓汁标本的采集和处理 1． 严格的无菌规范采集标本。 2． 标本采集后应该尽快进行分离培养，以提高阳性检出率。对用于检查脑膜炎球菌的标本 ，还要注意保湿，防治干燥。 3． 有些标本，在分离培养时需要做预处理。如尿液和脑脊液标本常需要做无菌离心，然后 取沉淀物进行培养。血液标本应首先做增菌培养。 4． 厌氧菌感染的脓汁标本常有腐臭味应予注意。标本采集和运送是否合格，对厌氧菌培养 至关重要。采集标本时，应避免被正常菌群所