16经典液相色谱法2精读.ppt

（三）实验方法 1. 色谱滤纸的选择 2. 点样 3. 展开 4. 显色 第三节 经典液相柱色谱法 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短 一、液-固吸附柱色谱 （一）分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的 吸附能力差异而实现分离 分离机制：见图示 吸附系数 注：Ka与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质 及温度有关 next 吸附平衡 Xm + nYa→Xa + nYm 图示 分离机制： 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离 吸附→解吸→再吸附→再解吸→无数次洗脱→分开 back 1. 硅胶（SiO2·XH2O） 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅羟基→氢键作用→吸附活性中心 特性： 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟 可逆失水 →吸附力最大 →500OC烘干 不可逆失水 →活性丧失，无吸附力 适用：分析酸性或中性物质 （二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 续前 2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析弱碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 3. 聚酰胺 氢键作用 氢键能力↑强，组分越后出柱 （三）色谱条件的选择： 依据被测组分、吸附剂和流动相的性质 1. 被测组分性质（极性大小）： 烃＜ - - - - - - - - ＜羧酸 2. 吸附剂的活性： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂 3. 流动相的极性： “相似相溶”原则 流动相极性↑，对极性组分的洗脱能力↑ 流动相极性↓，对弱极性组分的洗脱能力↑ 续前 4. 三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非 弱 极性 活性大 非极性或弱极性 二、液液分配柱色谱法 要求： 固定相→机械吸附在惰性载体上的液体 流动相→必须与固定相不为互溶 载体→惰性，性质稳定， 不与固定相和流动相发生化学反应 分离机制见图示 狭义分配系数 注：K与组分的性质、流动相的性质、固定相的性质 以及柱温有关 next 图示 分离机制 利用组分在流动相和固定相间溶解度差别实现分离 连续萃取过程 back （三）离子交换柱色谱法 要求： 固定相→离子交换树脂 流动相→水为溶剂的缓冲溶液 被分离组分→离子型的有机物或无机物 分离机制见图示 选择性系数 阳离子交换树脂 RSO3-H+ + X+ → RSO3-X+ + H+ 注：Ks与离子的电荷数、水合离子半径、流动相性质、 离子交换树脂性质以及温度有关 next 固定离子 可交换离子 待测离子 图示 分离机制： 依据被测组分与离子交换剂交换能力（亲和力） 不同而实现分离 back 四、分子排阻色谱法 要求： 固定相→多孔性凝胶 流动相→水——凝胶过滤色谱 流动相→有机溶剂——凝胶渗透色谱 分离机制见图示 渗透系数 注：Kp仅取决于待测分子尺寸和凝胶孔径大小， 与流动相的性质无关 next 扩散平衡：Xm → Xs 图示 分离机制： 利用被测组分分子大小不同、在固定相上选择性 渗透实现分离 back 结论： 四种色谱的分离机制各不相同，分别形成吸附平衡、分配平衡、离子交换平衡和渗透平衡 K分别为吸附系数，狭义分配系数，选择性系数和 渗透系数 除了凝胶色谱法中的K仅与待测分子大小尺寸、凝胶 孔径大小有关外，其他三种K值都受组分的性质、流 动相的性质、固定相的性质以及柱温的影响 第四节 薄层色谱法 （一）概述 （二）吸附剂的选择 （三）展开剂的选择 （四）操作方法 （五）定性与定量分析 （六）应用与示例 （一）概述 1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2．分离机制：吸附（分配，空间排阻） 3．操作过程： 铺板 →点样 → 展开 →显色 定位 →定性/定量 4．特点：分析快速、灵敏、显色方便 5．应用：药物杂质检查、鉴别、纯度测定、中间体测定等 （二）吸附剂的选择 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强——弱极性吸附剂 被测物极性弱——强极性吸附剂 硅胶G——自含粘和剂 硅胶H——不含粘和剂，铺板时另加入CMC 硅胶FH254——含荧光剂，254