基于量子点及磁微粒技术快速检测抗原的研究 .doc

应用量子点及磁微粒技术快速检测阴道毛滴虫抗原 李 蒙，蒲晓允，李 玲，余娟春（第三军医大学新桥医院检验科，重庆 400037） 摘 要:目的 以阴道毛滴虫（richomonas vaginalis,Tv）检测为切入点，构建以量子点和磁微粒技术为基础的夹心法快速检测抗原技术，为同步多项抗原检测作准备。方法 针对Tv特异性黏附蛋白AP33制备其抗体，以碳二亚胺交联法，分别连接抗体-量子点及抗体-磁微粒加入待测抗原AP33结合后，在荧光显微镜下观测结果。结果 确立了本检测系统的最优条件，对AP33的检测与几种阴道常见病原菌无交叉反应，检测为0.05μg/m。结论 量子点磁微粒检测技术对Tv抗原。 关键词量子点 磁微粒 阴道毛滴虫 抗原检测LI Meng, PU Xiao-yun,LI Ling, YU Juan-chun Department of Clinical Laboratory, Xinqiao Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400037,China Abstract： Objective To establish and apply a new method for detect the Trichomonas vaginalis’ atigen AP33 a 33 kDa adhesive protein based on the quantum dots and magnetic beads and by way of foundation to diagnose multiplex targets at one time.Methods Used the carbon diimine crosslinking method to fix the antibody on the quantum dots and magnetic beads,they combined with the antigen AP33 by with-filling method. The complex was massed by a magnetic field and diagnosed by a fluorescent microscope system. Results The AP33 was successfully detectede at the consentration 50ng/ ml by this with-filling method and was specific.Conclusion This with-filling method has a high concordance with isolated cultureand colloidal gold method in detecte .The Accuracy is 88% and the Specificity is 90%. Key words：quantum dots；magnetic beads；trichomonas vaginalis； antigen detecte 阴道毛滴虫（richomonas vaginalis,Tv）是一种常见的寄生于人体泌尿生殖系统的鞭毛虫。主要寄生于女性阴道、尿道及男性尿道和前列腺内，引起以性传播为主的泌尿生殖道传染性疾病，如滴虫性阴道炎、尿道炎和前列腺炎。阴道毛滴虫是目前妇科最为常见的引起阴道炎和非淋菌性尿道炎的病原菌之一[1] ，同时也是不孕不育症的重要病因。国内近年滴虫性阴道炎发病率有回升趋势[2]Tv感染首先从黏附于宿主泌尿生殖道上皮细胞开始，此步骤至关重要。这一功能需借助其表面的黏附蛋白完成。研究表明，黏附蛋白AP33作为Tv的高特异性黏附因子，有较强的抗原性和免疫原性[3]。我们基于量子点（quantum dots，QD）及磁微粒（magnetic beads）技术，希望建立一 基金项目：重庆市人口和计划生育委员会资助项目（06-2-04） 作者简介：李 蒙，男，上海人，硕士，主要从事微生物检测方面的研究。电话：1座机电话号码39，E-mail：steve_mclee@ 通信作者：蒲晓允，电话:（023）座机电话号码 2009-02-12 种针对Tv抗原的较为敏感的，以磁性微粒-抗体-待测抗原-抗体-量子点复合物为基础的检测体系。 1 方法 1 .1 试剂与材料 阴道毛滴虫活体取自我院门诊阴道后穹隆拭子镜检阳性标本。白色念珠菌（ATCC14053）金黄色葡萄球菌（ATCC25923）大肠杆菌（ATCC25922）均为我科保存菌种。黏附蛋白AP33及由深圳菲鹏生物有限公司制备。B/c小鼠（