基因工程试题标准答案及评分标准B.doc

基因工程试题2 标准答案及评分标准 一、名词解释（每题2分，共10分） 1、重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称之为转化。 2、DNA基因文库：通过克隆方法保存在适当宿主中的某种生物，组织，器官或细胞类型的所有DNA片段而构成的克隆集合体。 3、选择标记基因，是一类编码可使抗生素或除草剂失活的蛋白酶基因，这种基因选择功能理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。CaCl2法将待检测的NA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相NA的位置上显示出杂交信号。通过outhern杂交可以判断被检测的NA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。1分，共40分） 1、B 2、D 3、C 4、D 5、A 6、A 7、B 8、C 9、C 10、B 11、C 12、C 13、B 14、B 15、B 16、D 17、D 18、B 19、B 20、C 21、D 22、B 23、A 24、B 25、B 26、B 27、D 28、D 29、B 30、B 31、C 32、C 33、C 34、B 35、D 36、C 37、D 38、D 39、B 40、B 三、填空题（每题0.5分，共10分） 1.（1）基因文库，目的基因; （2）质粒，限制酶和DNA连接酶，重组基因，受体细胞; （3）土壤农杆菌;（4）都是由四种脱氧核苷酸组成和有规则的双螺旋结构,人的干扰素基因在大肠杆菌体内表达成功 四、简答题（共30分，每题5分） 1、答: 获得目的基因常用的有下列五种方法： ①化学合成 ②聚合酶链反应（PCR） 方法扩增目的基因 ③建立基因组DNA文库 ④构建cDNA文库筛选目的基因 ⑤其他方法 2、试举例说明基因工程中为什么常用大肠杆菌作为工程菌？ 答：①经过长期研究，人们已经掌握了十分丰富的有关大肠杆菌基础生物学、遗传学以及分子生物学等方面的背景知识，特别是对其基因表达调控的分子机理有了深刻的了解； ②大肠杆菌已被发展成为一种安全的基因工程实验体系，拥有各类适用的寄主菌株和不同类型的载体系列； ③实验已经证明，许多克隆的真核基因，例如抑制生长素基因和胰岛素基因等，都可以在大肠杆菌细胞中实现有效的、高水平的表达； ④大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，易于进行工业化批量生产。 3、简述酶切反应体系及反应条件？ 答：酶切反应体系几个关键因素。比如在正确的反应体系中，加入适量的DNA、内切酶和缓冲液，就可以获得最佳酶切效果。在 50 μl体系中，1 单位的限制性内切酶可以在60 分钟内完全切割 1 μg 的底物 DNA。上述酶、DNA 与总反应体积的比值做为建立反应体系的参考数据。DNA模板的纯度，② 减少DNA的甲基化程度，③适宜的酶切反应温度，④ 简单的DNA的分子结构，⑤适合的缓冲液 4、载体基本组成是什么?如何构建? 答：载体基本组成是①有复制起始位点，在宿主细胞中能保存下来并能大量复制；②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，可适于多种限制酶切割的DNA插入；③有一定的标记基因，便于进行筛选。 构建包括下列三个过程： A 目的基因分析（1）ORF 分析（2）酶切位点分析 B 载体选择与分析（1）多克隆位点分析（2）抗性标记分析（3）启动子与其他筛选标记分析 C 连接体系与连接时间确定 5、限制性核酸内切酶有几种类型？常用是哪种类型并简述其特性。 答：限制性核酸内切酶有三种类型：Ⅰ 型限制性内切酶、Ⅱ 型限制性内切酶和 Ⅲ 型限制性内切酶。 常用的是Ⅱ 型限制性内切酶。它具有识别并特异切割DNA分子的功能。 它的反应特点为：仅需 Mg2+ 作催化反应辅助因子，能识别双链DNA特殊序列，并可特异切割DNA，产生特异片段；是种类繁多，分子克隆中最为常用的内切酶。 五 论述题（一题10分，共10分） 论述重组子的筛选和鉴定常用的方法。 答:含有重组DNA分子的克隆子被称为重组子，如果重组子中含有外源目的基因则又称为阳性克隆子。筛选和鉴定阳性克隆子常用的方法有以下几种：①遗传表型直接筛选法：在构建基因工程载体系统时，通常在载体DNA分子中组装了一种或两种选择标记基因，在受体细胞内进行表达，呈现出特殊的表型或遗传学特性，作为筛选转化子的依据。例如：抗性基因以及表达产物，相应的选择条件是可以被抗性基因产物分解的抗生素，常用的有抗氨苄青霉素 ，抗议卡那霉素 和抗四环素基因。 ②依赖于重组子结构特征分析的筛选法：主要是根据有外源DNA片段插入载体后的重组DNA与载体DNA之间的大小差异来鉴定重组子。分别提取不同转化子的DNA，经琼脂糖凝胶电泳，由