实验七花粉生活力的观察.doc

实验七 花粉生活力的观察 技能目标 掌握鉴定花粉生活力的几种常用方法。 一、花粉萌发测定法 一 原理 正常成熟花粉粒具有较强的活力, 在适宜的培养条件下能萌发和生长在显微镜下可直接观察与计数萌发个数, 计算其萌发率, 以确定其活力。 二 器材与用具 显微镜、恒温箱、培养皿、载玻片、玻棒、滤纸。 培养基（10%蔗糖，10mg·L-1硼酸，0.5%琼脂）：称10g蔗糖，1mg硼酸，0.5g琼脂与90ml水放入烧杯中，在100℃水浴中溶化，冷却后加水至100ml备用。 （三）方法与步骤 1．培养花粉。将培养基熔化后，用玻璃棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润滤纸的培养皿中，保湿备用。 采集丝瓜、南瓜或其它葫芦科植物刚开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱 或室温 20 ℃ 下培养5～10min。 2. 观察。用显微镜检查5个视野, 统计萌发花粉个数。 二、碘—碘化钾染色测定法 （ 一 原理 大多植株正常成熟的花粉呈圆球形, 积累着较多的淀粉, 用碘—碘化钾溶液染色时,呈深蓝色。发育不良的花粉往往由于不含淀粉或积累淀粉较少, 碘—碘化钾溶液染色时呈黄褐色。故可用碘—碘化钾榕液染色法来测定花粉活力。 二 器材与用具 显微镜、天平、载玻片与盖被片、镊子、烧杯、量筒、棕色试剂瓶。 碘—碘化钾溶液:取2g碘化钾溶于 5～10ml蒸溜水中,加人1g碘,充分搅拌使完全溶解后, 再加蒸溜水300ml时, 摇匀贮于棕色试剂瓶中备用。 三 方法与步骤 1. 制片与染色。采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药 , 取一花药于载玻片,加1滴蒸溜水,用慑子将花药捣碎, 使花粉粒释放。再加1-2滴碘—碘化钾溶液 , 盖上盖玻片。 2. 观察。观察2-3张片子, 每片取5个视野, 统计花粉的染色率, 以染色率表示花粉的育性。 三、氯化三苯基四氮唑法 TTC 法 一 原理 具有活力的花粉呼吸作用较强, 其产生的NADH或 NADPH能将无色的TTC 还原成红色的TTC而使花粉本身着色。无活力的花粉呼吸作用较弱,TTC 颜色 变化不明显, 故可根据花粉着色变化来判断花粉的生活力。 二 用品与材料 显微镜、恒温箱、烧杯、量筒、天平、镊子、载玻片与盖玻片、棕色试剂瓶。 05%TTC 溶液: 称取 0.5gTTC 放入烧杯中,加少许95%酒精使其溶解, 然后用蒸溜水稀释至 100ml,贮于棕色试剂瓶中避光保存 若溶液已发红,则不能再用 。 三 方法与步骤 1.染色。采集植物花粉,取少许放在载玻片上, 加1～2 滴0.5% TTC溶液,盖上盖玻片,置 35 ℃恒温箱中,10～15min 后镜检。 2.镜检。观察2-3张片子,每片取5个视野镜检,凡被染红色的花粉活力强,淡红次之,无色者为没有活力或不育花粉,统计花粉的染色率, 以染色率表示花粉活力的百分率。 四、作业 1. 上述每一种方法是否适合于所有植物花粉活力的测定?