实验十一酶作用的专一性.doc

实验 酶作用的专一性 一、目的：了解酶的一种催化特性―对底物的选择性及检查酶的专一性原理与方法。 二、原理 酶作用的专一住是酶与一般催化剂的主要区别之一，所谓酶作用的专一性，即酶仅与一种或一类相似的物质起一定的催化作用，而对其它物质则不能起催化作本实验以蔗糖酶（来源于酵母）及枯草杆菌α ―淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶作用的专一性。 淀粉和蔗糖缺乏自由醛基（苷羟基），无还原性，但在α ―淀粉酶的作用下，淀粉很容易水解成为糊精及少量麦芽糖，葡萄糖，使之具有还原性。在同祥的条件下，α ―淀粉酶不能催化蔗糖的水解，蔗糖酶能催化水解蔗糖生成具有还原性的葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉水解． 本实验采用本尼迪克特（Benedict）试剂检测还原糖。 三、试剂与器材 试剂： 1. 2% 蔗糖溶液。 2. 1%可溶性淀粉淀液。 称取可溶性淀粉1克，加水10 ml搅成糊状，倾入90 ml预先煮沸的蒸馏水中，搅拌均匀，再煮沸2～3分钟,冷却后定容至100 ml此溶液需新鲜配制。 3．枯草杆菌。α ―淀粉酶的稀释液。 4. 蔗糖酶液：取适量干酵母100 克，置于研钵内，加少量细砂及50 ml蒸馏水，用力研磨提取约l 小时，再加蒸馏水使总体积为500 ml左右，过滤。滤液保存于冰箱内备用。 5．本尼迪克特（Benedict）试剂：将17.3克硫酸铜溶于约50 ml蒸馏水中，另将173 克柠檬酸钠及100克碳酸钠加于约800 ml蒸馏水中，加热，搅拌使之溶解，冷却后将上述碳酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸一碳酸钠溶液中，混匀，并稀释到100 ml。此试剂可长期保存。 器材：1．试管及试管架2．恒温水浴锅3．吸管5 ml 3支 l ml 2支 2 ml 1支 四、操作 1. 取2 支试管，各加入本氏试剂2 ml,分别加入l %可溶性淀粉溶液和2 %蔗糖溶液各4滴，混合均匀后，放在沸水浴中煮2～3分钟，观察有无红黄沉淀发生，纯净的淀粉和蔗糖应无红黄色沉淀产生。 2. α ―淀粉酶的专一性试验 取3 支试管，分别加入1%可溶性淀粉3 ml , 2 %蔗糖溶液3 ml及蒸馏水3 ml, 再向3支试管各添加α ―淀粉酶稀释液lml，混匀，放入37 ℃ 恒温水浴中保温，15分钟后取出，各加本氏试剂2 ml，摇匀后，放在沸水浴中煮2～3分钟，观察有无红黄色沉淀产生？为什么？ 3. 蔗糖酶的专一性试验 取3 支试管，分别加入l %可溶性淀粉溶液3 ml , 2 %蔗糖溶液3 ml及蒸馏水3 ml。向3支试管各添加蔗糖酶液l ml，混匀，放入37 ℃ 恒温水浴中保温，10 分钟后取出，各加本氏试剂2 ml ，摇匀后，放入沸水浴中煮2～3 分钟，观察有无红黄色沉淀产生？为什么？ 思考题1．纯净的淀粉和蔗糖有无还原性，为什么？ 2．的专一性分哪几类？ 3．酶的专一性实验，为何设计这三组？ 实验 温度对活性的影响 一、目的要求1．了解温度对酶活性的影响2．掌握试验温度对酶活性影响的原理及方法 二、原理 酶的催化作用受温度的影响很大，温度对酶催化的反应有双重效应，一方面，温度可以使酶催化反应速度加快；另一方面，温度升高又可使酶因变性而失活而使酶催化反应速度降低。本实验以枯草杆菌α ―淀粉酶和蔗糖酶为例，说明温度对酶活性的影响。 三、试剂与器材试剂： 1. 05 ％可溶性淀粉溶液，新鲜配制。 2. 2 ％蔗糖溶液碘—碘化钾溶液：将碘化钾20 克及碘10克溶解到100ml水中，使用前稀释10倍。 本尼迪克特试剂5.α ―淀粉酶稀释液6. 蔗糖液7．冰器材：1．试管及试管架2．恒温水浴锅 3. 吸管 5ml 2支；2ml 1支；1ml 2支 四、操作温度对α ―淀粉酶活性的影响 取3 支试管，编号，各入0.5 ％可溶性淀粉溶液3 ml，分别置于冰水浴。37℃水浴及沸水浴中，保温5 分钟，各缓缓加入1ml淀粉稀释液（试管勿从水浴中取出）继续保温5 分钟．取出37℃水浴及沸水浴中试管置于冰水浴中冷却后，各加入碘—碘化钾溶液约，比较各管颜色，并解释之。温度对蔗糖酶活性的影响 取3 支试管，编号，各加入2 %蔗糖液3 ml ，分别置于冰水浴，37℃水浴及沸水浴中，保温5 分钟后，各加入lml蔗糖酶液，继续保温10 分钟，取入一各加入2 ml 本氏试剂，置于沸水浴中煮2 分钟。比较各管颜色，并解释之。思考题：1. 温度对酶活影响的机理。2．试验温度对酶活性影响的一般方法。3．如果要定量测定温度对酶活性的影响，实验方案应如何设计？