重大动物疫病样品的采集及前处理.doc

重大动物疫病样品的采集及前处理 采集样品的重要性 采集检测样品是诊断检测工作的重要内容。采样的时机是否适宜，样品是否具有代表性，样品处理、保存、运送是否合适及时，与检验结果的准确性、可靠性关系极大。 二、样品采集原则 1、 动物疫病样品采集遵循适时、典型、无菌、适量和生物统计的原则。 2 、对急性死亡的患畜（马、牛、羊及猪等），若怀疑是炭疽等烈性传染病时，从耳尖或四肢未梢血管取血制成涂片，染色镜检，在排除炭疽后方能剖检采样。 3、 根据不同的检验要求进行样品采集，采取包括相应的组织器官、内容物、分泌物、排泄物或其他材料。 4、 进行流行病学调查、抗体监测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品数量应满足生物统计学的要求。 5 、无法估计病因时，可对组织器官、分泌物和排泄物进行系统全面的的采集。 6 、如患畜（禽）已死亡，应尽快采集样品，死亡时间夏天不得超过6h，冬天不超过24h. 7、动物剖检中应做好人身防护，严防人畜共患病感染。 8、采集病原微生物样本的工作人员应防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和动物尸体的处理。 9、对样本的来源、采集过程和方法等作详细记录。 三、器械准备 1、器械的选择根据采集样品的需要，分别选择不同的器械、容器等器材。 2、器材无菌处理2.1 金属器械可采用高压、干热、煮沸消毒30min。 临用时75%酒精拭擦，或用时进行火焰消毒。2.2 器皿（玻制、陶制等）经103kPa高压30min， 或160℃干烤2h灭菌，或经0.5%～1%碳酸氢钠水中煮沸10min～15min，再用无菌纱布擦干，无菌保存备用。 3、采样单、笔、防护用品等的准备。 4、消毒药物准备。 四、血清样品的采集和处理 牛——颈静脉、尾根静脉 羊——颈静脉 猪——小猪用前腔静脉、大猪站立式采前腔静脉 禽——正常用翅静脉（还可用心脏或桥静脉联合血窦） 大型动物采血量分别为5毫升，家禽的采血量为2-3 毫升。血样收集于无菌的试管或采血器中，于37℃放置30分钟，以促进血液的凝固及血清的渗出，然后置于4℃过夜，在2000-4000rpm离心5分钟，取血清装到灭菌的指形管或青霉素小瓶中。若无条件的畜禽场也可直接将样品置4℃，并尽快送至检测室。 五、口蹄疫样品的采集 1、组织样品选择 1.1用于病毒分离鉴定的样品以发病动物（牛羊猪）未破裂的水泡皮和水泡液为最好。对临床健康但怀疑带毒的动物可在扑杀后采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品作为检测材料。 1.2、样品的采集和保存 样品采集部位可用清水清洗，剪取病畜的新鲜水泡皮3-5克放入灭菌小瓶中，加适量50%甘油/磷酸盐缓冲液（pH7.4），加盖封；也可用无菌器具采集水泡液至少1毫升，装入灭菌小瓶中（可加适量抗菌素），加盖密封。尽快冷冻保存。 1.3、在无法采集水泡皮和水泡液时，可采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品3-5克装入洁净小瓶内，加盖密封尽快冷冻保存。 2、牛、羊食道-咽部分泌物（O-P液）样品 2.1、样品采集 被检动物在采样前禁食（可饮水）12小时，以免胃内容物反流污染O-P液。采样探杯在使用前使用0.2%柠檬酸或2%氢氧化钠浸泡5分钟再用洁净水冲洗。每采完一头动物，探杯要重复进行消毒并充分清洗。采样时动物站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10-15cm处，轻轻来回移动2-3次，然后将探杯拉出。 2.2、样品的保存 将采集到的8-10mL O-P液倒入25ml以上的灭菌玻璃容器中，容器中应事先加有8-10ml细胞培养液或磷酸盐缓冲液（0.04mol/L、pH7.4),密封后充分摇匀后尽快冷冻保存，用于病原检测，做出追溯性诊断。 六、高致病性禽流感样品的采集 (一)病禽 ?1、至少从5只濒死禽采集样品。 样品包括： 泄殖腔拭子和气管拭子(置于缓冲液中)各5个(小珍禽可采集新鲜粪便)； 气管和肺的混样5个； 肠管及内容物的混样5个； 肝、脾、肾和脑等组织样品(不能混样)各5个。 采集方法： 1)泄殖腔棉拭子： 将棉拭子插入肛门并旋转，使粪便沾在拭子上，后放在运输缓冲液中。 2)气管棉拭子： 活鸡采样时，将棉拭子插入活鸡的气管内，轻轻擦拭气管壁并放入缓冲液中。死亡动物采气管样品时，可在肺和气管离体情况下进行采集，应将棉拭子插入较深部位用力擦拭，并按上述方法将棉拭子放在运输缓冲液中。 3)粪便样品：可从活禽市场采取新鲜粪便，用棉拭子沾取粪便，并将采好的样品放在运输缓冲液中。 2、分别采集至少10个病鸡的血样(急性发病期血清)。采集10只病禽的血样，使用一次性采血器，心脏或翅静脉采血，每只禽采血样2ml～3ml，经离心或自然析出血清后，将血清移到指形管中。封好口，贴好标签。不同禽只的血样不能混合。  (二)病死禽 ?无发病禽时，可从死