CpG-conaining 寡聚脱氧核苷酸对新化疗药物Coramsine的抗肿瘤.doc

CpG-containing 寡聚脱氧核苷酸对新化疗药物Coramsine的抗肿瘤增强效应 [概述]Coramsine（即龙葵总碱）是一种从Solanum linnaeanum（devil’s apple）中提取出来的新的化疗药物．临床上主要用于治疗皮肤肿瘤．本实验通过研究Coramsine对恶性间皮细胞瘤的小鼠模型的体内抗肿瘤效应来探讨Coramsine更广泛的临床应用前景．研究发现Coramsine全身用药可以延缓肿瘤生长和延长小鼠生存期．并且当Coramsine与ODNs 联用时,未甲基化的ODNs作为先天免疫系统的激活物可以增强Coramsine的抗肿瘤效应.两药联用更为有效的延缓了肿瘤的生长和提供生存获益. Coramsine 可能是通过直接裂解细胞的方式来杀死肿瘤细胞.我们用两种不同的方法来检测凋亡(caspase 激活和DNA断裂),没有发现Coramsine诱导任何形式的程序化细胞死亡的证据.实验发现, 由ODNs 增强的Coramsine的抗肿瘤效应表明Coramsine介导的细胞死亡是一种与免疫学无关的事件。 [关键词]化学治疗, CpG寡聚脱氧核苷酸,免疫治疗, 恶性间皮细胞瘤 (J Immunother 2006;29:134-142) 细胞毒性化疗仍然是大部分实体肿瘤治疗的最好选择.然而,并非所有肿瘤都对此有效.单一模式的药物化疗已经很难治愈肿瘤,部分原因是目前的单药治疗容易导致肿瘤细胞产生耐药性.因此有必要探索新的化疗药物用于以后的化疗或与其他治疗方式的联用上.一般情况下我们通过以下两种思路寻找药物。一是新药物能够特异性的干扰象细胞繁殖这样的生化途径，如抗代谢药物吉西他滨.二是,新药物中的有效成分可以在天然复合物中被发现和提取出来，如红豆杉、紫杉酚类的药物。 Daunter 和 Cham在20世纪90年代发现在澳大利亚昆士兰地区的一种叫做Solanum linnaeanum （即龙葵）的植物可以有效的延缓牲畜皮肤癌的发展在此基础上提出了几种具有细胞毒作用的甾体生物碱苷类成分。混合物中的两种活性生物碱成分澳洲茄碱和澳洲茄边碱共享一个各种三糖碳水化合物附着的甾体配基。随后人们把这两种复合物用来治疗表浅的皮肤疾病如角化病、基底细胞癌、和鳞状细胞癌，并把它推向市场。澳洲茄碱和澳洲茄边碱的混合物最初被称为SBP002现在被命名为Coramsine，体外细胞实验发现它有更宽的抗癌谱说明其可能有更广的应用范围。 最初人们提出龙葵总碱的细胞毒作用是直接裂解细胞。现在也有观点认为诱导凋亡也是这些生物碱类的细胞毒作用机制。但在我们实验当中，尚未发现支持龙葵总碱诱导凋亡的证据。我们在恶性间皮细胞瘤的小鼠模型上进一步研究了Coramsine对实体肿瘤的疗效。实验证明Coramsine全身用药可以减缓肿瘤生长和提供适度的生存获益。Coramsine 目前正在由Australia Special Access Scheme机构进行临床实验评估。这是一个对未上市药品有选择性的对病人进行临床实验的机构。 近年来，肿瘤化疗逐渐与免疫治疗相结合。我们先前的实验证明抗代谢药物吉西他滨作用于恶性间皮细胞瘤小鼠模型，可以通过凋亡促进肿瘤细胞死亡并增加了淋巴灌注区（DLNs）肿瘤抗原的表达。吉西他滨联合对抗抗-CD40的FGK-45抗体激活树状突细胞上的CD-40的免疫辅助的治疗方式对肿瘤有很高的治愈率。目前化疗和免疫结合的综合治疗已经越来越多样化。 比较有前景的免疫治疗方法是通过免疫治疗来激活机体的先天免疫系统。这种治疗方式本质上与CD-40的激活是不同的，后者实际上是一种后天获得性免疫治疗。(postlicensing therapy)，如淋巴灌注区启动事件后的T淋巴细胞的激活。而先天免疫系统的激活会反过来增强启动事件 。先天免疫系统可以被脂多糖（LPS）、鞭毛素、双链RNA、和未甲基化的含有CpG 结构的寡聚脱氧核苷酸等不同的微生物结构所激活，机制主要与病原体的分子结构有关。细胞上的受体如TLRs识别这些结构并激活先天免疫反应。在临床前期实验中，我们发现几种TLR配体尤其是双链RNA以及与之具有相似药代动力学的多聚次黄嘌呤核苷酸和含有CpG 结构的寡聚脱氧核苷酸具有抗肿瘤活性并且在与其他治疗方式联用时具有协同作用 我们发现Coramsine对免疫系统有轻微毒性，因此我们研究了其与不同的免疫刺激治疗（如激活CD40或多聚次黄嘌呤核苷酸和含有CpG 结构的寡聚脱氧核苷酸等TLR配体治疗）相结合时的治疗获益 。结果发现Coramsine与CpG-ODNs联用可以降低肿瘤生长速度而与FGK-45联用时没有协同作用。 材料和方法： 1 细胞培养和试剂 鼠AB1-HA恶性间皮细胞瘤细胞株贴壁培养在DMEM中，DMEM由20m