专题3菊花组织培养详解.ppt

专题3 植物组织培养技术 一、基础知识 课题1： 菊花的组织培养 1、植物的组织培养 　　　　是指在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。 植物组织培养： 1、植物组织培养的原理是什么？ 植物细胞具有全能性 思考： 一.植物组织培养的基本过程 细胞的全能性 ①定义： 生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性 ②原理： 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因 高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质 已分化的植物细胞，仍具有全能性 ③实例 受精卵生殖细胞体细胞 ④全能性的比较: （3）植物组织培养 细胞离体 ①必要条件： 一定的营养物质、激素和其他外界条件 ②原理: 细胞的全能性 外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官 ③相关概念: 脱分化： 再分化： 愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞 人参的愈伤组织 愈伤组织 2、影响植物组织培养的因素 营养：矿质元素：大量元素，微量元素 植物激素： 环境条件： 外因 内因：材料 植物种类，同一种植物材料的年龄、保存时间的长短 有机物 ：蔗糖、氨基酸等 细胞分裂素，生长素 适宜光照、温度、 PH 讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主。MS培养基则提供大量无机营养。 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA） 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3） （3）植物激素的影响 ②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用细胞分裂素后使用生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率高 生长素 细胞分裂素： 有利于根的分化，抑制芽的形成 生长素 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑制根的形成 生长素 细胞分裂素： ＝ 促进愈伤组织生长 ③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响 （4）pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h 3、植物组织培养过程: 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 生长素细胞分裂素 生长素细胞分裂素 再分化 植物细胞培养 不需要光 需要光 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培养 栽培 四、实验操作（注意无菌） 移栽 冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上 不要倒插 将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中 植物组织培养过程中，哪些可能带菌？如何灭菌？ A. 操作者双手 B. 外植体 C. 培养基 D. 接种用的解剖刀，镊子等 E. 接种室 -------高压蒸汽灭菌 ------酒精、氯化汞 -----------酒精 -----酒精、酒精灯灼烧 -----------紫外灯 （四）培养 1、愈伤组织的培养 从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养 继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养 2、愈伤组织的继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色