大肠杆菌培养汇总.ppt

选修1《生物技术实践》 锁定：（1）培养基的配比与制作 （2）无菌技术 （3）接种之平板划线操作 （4）菌落观察 按照培养基的用途划分 * * * * * * * * * * * 2014年高考考试说明知识内容 1-1微生物的利用 （1）大肠杆菌的培养和分离 （2）分离以尿素为氮源的微生物 1-2酶的应用 （1）果汁中的果胶和果胶酶 （2）α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 1-3生物技术在食品加工中的应用 （1）果酒及果醋的制作 （2）泡菜的研制和亚硝酸的测定 1-4浅尝现代生物技术 植物的组织培养 实验1大肠杆菌的培养和分离 一、基础知识： （二）培养基 （1）按物理状态分： 固体培养基、液体培养基、半固体培养基。 其中固体培养基用于菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数等，半固体培养基可观察微生物的运动，液体培养基常用于发酵工业。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 1.培养基的类型和用途 2.不同的微生物往往采用不同的培养基配方， 基本营养要素：水、碳源、和氮源、 无机盐营养物质， 还要考虑的因素？ PH、渗透压等 例子 用途 制备方法 种类 选择培养基 鉴别培养基 培养基中加入某种化学物质 培养基中加入某种指示剂或化学药品 从众多微生物中分离所需的微生物 鉴别不同种类的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 伊红－美蓝培养基可鉴别大肠杆菌 1、培养基的划分： 碳源 作用 最常用来源 来源 概念 凡能为微生物提供所需碳元素的营养物质 无机碳源：CO2NaHCO3等 有机碳源：糖类脂肪酸、花生粉饼、石油等 糖类、尤其是葡萄糖 1、主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物 2、异养微生物的营养物质 2.微生物需要的五大类营养（主要是碳源和氮源） 氮源 作用 最常用来源 来源 概念 凡能为微生物提供所需氮元素的营养物质 无机氮源：N2、氨、铵盐、硝酸盐等 有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白栋、氨基酸等 铵盐、 硝酸盐 主要用于合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物 此外，还需要无机盐、水分和生长因子（如维生素等） 细菌分类 细菌 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 对青霉素更为敏感。 金黄色葡萄球菌、炭疽芽孢杆菌、链球菌等 大肠杆菌（兼性厌氧型） 二、无菌技术 1.无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 2.消毒与灭菌的区别 消毒：利用化学或物理方法，杀死大部分致病微生物的过程。 灭菌：以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。 (2)灭菌的方法： 1、灼烧灭菌（接种环） 2、高压蒸汽灭菌：1Kg/cm2 压力、121 ℃下维持15min。 （灭菌锅或高压锅、三角瓶） 3、过滤灭菌 （G6玻璃砂漏斗） 4、紫外线灭菌 1、培养基配制 灭菌：高压蒸汽灭菌：1Kg/cm2 压力、121 ℃下维持15min 细菌培养基：蛋白胨和酵母提取物来配制，还有加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压，PH:中性偏碱。 霉菌：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁，PH:中性偏酸。 尿素（加热会分解）：用G6玻璃砂漏斗过滤，121 ℃下用纸包灭菌 培养基分装到各三角瓶、试管和培养皿等不能沾到培养基，否则容易发生污染 实验中所需的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染 2、倒平板 将灭菌后冷却到600C的LB固体培养基，在酒精灯火焰旁倒入灭菌过的培养皿中，制备培养基平板 3、微生物接种 将大肠杆菌从斜面接种到LB液体培养基中在酒精灯火焰旁操作，接种前先冷却。在370C，每分钟200转的摇床中振荡培养12h 接种环：灼烧灭菌 4、分离：划线分离法、涂布分离法 划线分离法（方法简单）：用接种环取振荡培养后的菌液，只在菌液中蘸一次，在固体培养基平板上划线，由于划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分的细菌间距离加大，每个细菌细胞产生一个菌落。 若在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离。 涂布分离法（单菌落更易分开，操作复杂）：需将培养的菌液稀释，玻璃刮刀（灼烧灭菌），有20个以内的单菌落为合适。 将培养皿倒置，防止培养基水分散失，空气中杂菌沉降。370C恒温培养箱中培养12~24h，观察菌落； 5、菌种的保存：在无菌下将单个菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上，370C培养24h，置于40C冰箱中保存。 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒