04遗传学实验-果蝇唾腺染色体案例.ppt

遗传学实验 果蝇唾腺染色体 制备与观察 一、实验目的 1.练习取出果蝇等幼虫唾腺的技术和制作唾腺染色体标本的方法。 2.观察多线染色体的特征： a.巨大； b.体细胞配对，所以染色体只有半数（n）； c.各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠拢形成染色 中心（chromocenter）； d.横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基 因的排列。 3.把观察到的好图像画下来。 二、实验原理 双翅类昆虫（摇蚊、果蝇等）幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体（salivary chromosome）。 这种染色体比普通染色体大得多，宽约5μm，长约400μm，相当于普通染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色体。 唾腺染色体经过多次复制而并不分开，大约有1000至4000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体（polytene chromosome）。 多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。如染色体有缺失、重复、倒位、易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。 三、实验材料 黑腹果蝇的三龄幼虫。这种材料既易饲养，又易取得唾腺，但为了得到更好的染色体标本，需要在20—25℃和营养良好的条件下饲养幼虫。选择行动迟缓、肥大，爬上管壁的三龄幼虫（就要化蛹了）做标本最佳。 四、实验仪器与试剂 1. 材料： 普通果蝇的三龄幼虫。 2. 器具： 双筒体视解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸等。 3. 药品： 改良苯酚品红溶液、生理盐水、1N盐酸。 五、实验步骤 实验前知识准备： 果蝇三龄幼虫的唾腺位于幼虫的头部附近，可以看看显微照片中的位置 实验开始 六、实验结果 1.先用低倍物镜观察片子，找到好的染色体图像后，放到视野中心，再用高倍镜观察。 七、实验分析与讨论 八、思考题 九、参考文献 张贵友，普通遗传学实验指导， 北京：清华大学出版社，2003 卢龙斗、常重杰，遗传学实验技术， 合肥：中国科学技术大学出版社，1996 刘祖洞、江绍慧，遗传学实验， 北京：高等教育出版社，1987 * * 三龄幼虫照片 （点击图片观察放大图） 1.唾腺剖取 把载玻片置于双筒镜下。载玻片上滴加生理盐水一滴，取三龄幼虫放在其中，操作者两手各握一枚解剖针，左手的解剖针压住幼虫后端1/3处，固定幼虫。右手的解剖针按住幼虫头部，用力向右拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出，唾腺是一对透明的棒状腺体 。 如图示 2. 解离：用吸水纸吸去生理盐水，然后加1滴1N HCl溶液于腺体上，作用10～15min。 3. 冲洗：用吸水纸吸去HCl ，滴加蒸馏水于腺体上进行冲洗（两次）。 4. 染色：吸去蒸馏水，加2～3滴改良苯酚品红溶液，染色30min以上。用镊子加盖玻片。 5. 观察： 镜检。 2.黑腹果蝇染色体是2n=2×4=8（图一），但因体细胞配对，又因短小的第4染色体和X染色体的着丝粒在端部，所以染色体的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一条线状和点状染色体。只有第2和第3染色体的着丝粒在中央，它们从染色中心以V字形向外伸出（2L，2R，3L，3R），因此共有6条（图二）。 在显微镜下，短小的第4染色体有时不易观察到，所以最容易识别的是第5条（图三）。 雄果蝇的Y染色体几乎包含在染色中心里，因为是异染色质，看起来染色可能淡些。有经验的人可以发现雄果蝇的X染色体比雌果蝇X染色体要细些，因为雄性只有一条X染色体。 3.唾腺染色体上的横纹宽窄、浓淡是一定的，但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不连续的膨胀，这称为疏松区（puff），目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。 1、根据实验的观察可以确定果蝇的染色体数目吗？ 2、制备果蝇唾腺染色体需注意那几个关键步骤？ 3、利用果蝇唾腺染色体可以进行哪些遗传学研究？ 果蝇三龄幼虫 下一张 果蝇三龄幼虫 下一张 果蝇三龄幼虫 返 回 果蝇唾腺位于头部附近 返 回 果蝇唾腺位于头部附近（放大图） 返 回 *